邻位连接技术：一种新的高灵敏度蛋白质检测技术

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1、ISSN100727626中国生物化学与分子生物学报2008年4月CN1123870PQChineseJournalofBiochemistryandMolecularBiology24(4):383～389·技术与方法·邻位连接技术:一种新的高灵敏度蛋白质检测技术1)1),2)3李丹滢,周国华(1)2)中国药科大学生命科学与技术学院,南京210009;华东医学生物技术研究所,南京210002)摘要蛋白质组学(proteomics)诞生以来,高效准确的蛋白质检测技术受到越来越多的关注.最近,一种高灵敏度的蛋白质检测

2、技术,邻位连接技术(proximityligationassay,PLA)被建立.该技术采用核酸适体(aptamer)或单P多克隆抗体2核酸复合物作为邻位连接探针(proximityprobes).当一对邻位探针同时识别同一个目标蛋白分子时,它们将在空间位置上相互临近,通过连接反应形成一段可扩增的DNA标签序列,该标签序列能够反映待测蛋白的种类及浓度.该技术将对蛋白质的检测转变为对DNA核酸序列的检测,实现了特殊蛋白质的检测,定量及定位.文章从该方法的产生背景,发展过程,原理以及探针制备等方面对该方法进行了系统的介

3、绍,列举了该方法的几种重要应用,并对该方法在蛋白质组学研究领域的应用前景进行了展望.关键词邻位连接技术;蛋白质组学;蛋白质检测中图分类号Q51ProximityLigationAssay:ANewandHighlySensitiveProteinDetectionMethod1)1),2)3LIDan2Ying,ZHOUGuo2Hua(1)CollegeofLifeScienceandTechnology,ChinaPharmaceuticalUniversity,Nanjing210009,China;2)Hua

4、dongResearchInstituteforMedicineandBiotechnics,Nanjing210002,China)AbstractEfficientandprecisetechniquesforproteindetectionarecrucialinproteomicsstudies.Recently,proximityligationassay(PLA),anewproteindetectiontechniqueinproteomics,wasdeveloped,andattractingmo

5、reandmoreresearchersinthefield.Theproximityprobes,aptamersorcomplexesofmonoPpolyclonalantibodywitholigonucleotide,aredesignedtobindpairwisetotargetproteinsandbeabletogiverisetoanamplifiableDNAsequencetagbyligationwhenbroughtinproximity,whichreflecttheidentitie

6、sandamountsofthetargetproteins.ThisapproachemploystheanalysisofDNAsequencesinsteadofthedirectdetectionofspecificproteins,thusachievehigh-sensitivityforthedetection,quantification,andevenlocalizationoftargetedproteins.Thebasicprincipleandthepotentialapplication

7、sofPLA,aswellassometechnicalissues,suchasthepreparationoftheproximityprobes,willbediscussedinthisreview.Keywordsproximityligationassay;proteomics;proteindetection人类基因组计划因毛细管阵列电泳测序技术的和DNA分子不同,它不能通过扩增技术使目的蛋白[1]发展得以提前完成.像毛细管阵列电泳一样,二维的分子数目增加,只能采用直接测定法,因此,检测电泳技术特别是

8、色谱2质谱联用技术的发展,也大大灵敏度受到极大限制.如果能用一种类似于PCR的[2]加快了蛋白质组学(proteomics)的研究步伐.但是,蛋白质分子比DNA分子复杂的多,要在分子水平上收稿日期:2007209227;接受日期:2007211230阐述表达量极低的蛋白质在生理过程中所扮演的角国家自然科学基金资助(No.30470454)色,就必须建立一种相