5.1 dna的粗提取与鉴定

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1、2：如何证明他们是遗传物质？3：怎样才能将细胞内的这些物质分离出来？1：构成生物体的遗传物质是什么？讨论DNA的粗提取与鉴定一、基础知识（一）提取DNA的方法1、提取生物大分子的基本思路选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子2、生物大分子：主要指蛋白质、酶和核酸3、提取DNA的基本思路利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分4、DNA的溶解性DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相

2、反5、讨论：①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，DNA的溶解度最小？DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？在NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。当氯化钠的物质的量浓度为2mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为0.14mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出。②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？

3、根据DNA与杂质的溶解度不同分离提取DNANaCI酒精（体积分数为95%的冷酒精）DNA不溶蛋白质在NaCI从2mol/L逐渐稀释的过程中溶解度逐渐增大某些蛋白质可溶95%的酒精在DNA提取中的作用：1.溶解某些蛋白质；2.抑制核酸水解酶的活性，防止DNA降解；3.降低分子运动，易于形成沉淀析出；4.低温有利于增加DNA分子的柔韧性，减少断裂。根据DNA分子与杂质对酶、高温、洗涤剂的耐受性不同来分离提取DNA.DNA蛋白质蛋白酶没影响水解高温80℃以上才会变性60～80℃会变性洗涤剂没影响瓦解细胞膜（破坏膜中的蛋白质分子）DNA不溶于酒精溶液

4、，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离6、DNA在酒精溶液中的溶解性7、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响②大多数蛋白质不能忍受60～80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性③洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响8、DNA的鉴定①DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂②紫外灯照射法A、配制染色剂，用蒸馏水配制万分之五的溴化已锭（EB）B、将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上，再滴一滴EB溶液染色C

5、、将蜡纸放在紫外灯(260nm)下照射（暗室中），可见橙红色的荧光(DNA的紫外吸收高峰在260nm处)③甲基绿（绿色）二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计（一）实验材料的选取1.材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物原红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中选取2～3种实验材料）2.原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大。动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液1

6、、动物细胞答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜2、植物细胞讨论：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解②实例：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行从分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液答：研磨不充分会使细胞核内

7、的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？（三）去除滤液中的杂质为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质讨论：为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质答：用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质讨论：方案二与方

8、案三的原理有什么不同？答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA