5.1DNA的粗提取和鉴定

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1、《选修1生物技术实践》教学案专题5DNA和蛋白质技术课题1DNA的粗提取和鉴定【学习目标】DNA的粗提取和鉴定。【学习过程】一、DNA的粗提取和鉴定：（一）实验原理：1、粗提取原理：提取生物大分子的基本思路是。对于DNA的粗提取而言，就是要利用、等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。（1）DNA与其他细胞成分在不同浓度溶液中的溶解度不同；请画出DNA在氯化钠溶液中的溶解度曲线。（２）DNA和蛋白质对、和的耐受性不同；蛋白酶能水解，但是对没有影响。例如使用________________；大多数蛋白质不能忍受60℃~80℃的高温，而DNA在

2、以上才会变性。例如可以使用_____________________℃的恒温水浴箱，严格控制温度范围；洗涤剂能够瓦解，但对DNA没有影响。（３）DNA不溶于＿＿＿＿＿＿＿溶液，但蛋白质则溶于＿＿＿。2、鉴定原理：在条件下，DNA遇会被染成色，因此____________可以作为鉴定DNA的试剂。另外DNA还能与___________染色剂反应，呈______________色。（二）实验过程：1、实验材料的选取：要选取含量较高的生物材料，否则会由于实验过程中或多或少的损失而造成检测的困难。例如可选择_____________________________

3、_____________等作为实验材料。2、破碎细胞，释放和溶解DNA：这一步是实验成功与否的关键，要尽可能使细胞内的DNA全部溶解。如果是动物细胞，直接加入一定量的，用玻璃棒搅拌；如果是植物细胞，需先用溶解细胞膜，再加入____________进行充分的搅拌和研磨。最后过滤，收集滤液。特别提示：提取鸡血细胞核物质时，应快速搅拌，其目的是加速血细胞破裂。3、去除滤液中的杂质（DNA的纯化）：根据DNA的溶解特性、对酶及高温的耐受性不同等特性，最大限度地将4《选修1生物技术实践》教学案与杂质分开。特别提示：向含核物质的2mol/LNaCl溶液中加入蒸馏水析

4、出DNA黏稠物时和DNA黏稠物再溶解于2mol/LNaCl溶液时以及用冷却的95%的酒精提取含杂质较少的DNA时，应轻缓搅拌，目的是尽量保持DNA分子的完整性。实验中四次过滤（填写下面表格）：第一次过滤第二次过滤第三次过滤第四次过滤过滤前加入的物质蒸馏水2mol/LNaCl蒸馏水（至0.14mol/LNaCl）2mol/LNaCl过滤目的滤液中所含物质纱布上遗留物质特别提示：（1）实验中两次用到蒸馏水的作用：第一次是提取鸡血细胞中的核物质时，目的是造成低渗环境，加速血细胞破裂，便于DNA析出；第二次是析出DNA过程中加蒸馏水，目的是使DNA的溶解度下降，从

5、而析出DNA。（2）盛放鸡血细胞液的容器，最好是塑料容器，因为DNA容易被玻璃容器吸附。4、DNA的析出与鉴定：用与滤液等体积的、冷却的溶液析出DNA；将玻璃棒上的丝状物溶于2mol/LNaCl溶液，加入4ml的试剂，将试管置于沸水中加热5min，观察颜色变化。（需设置不加DNA的对照组）（三）注意事项：1、以血液为实验材料时，不能选择___________动物的血液，因为________________________________________________。取血时，需要加入________________，防止血液凝固。2、加入洗涤剂后，动作要

6、________________________。否则容易产生_________________________________________________________。3、加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧_____________________________________________________________。4、二苯胺试剂要___________________，否则会__________________。【巩固练习】1．在制备鸡血细胞液的过程中，加入柠檬酸钠的目的是A．防止凝血B．加快DNA析出C．加快DNA溶解

7、D．加快凝血2．下列操作中，对DNA的提取量影响较小的是A．使鸡血细胞在蒸馏水中充分破裂，放出DNA等核物质B．搅拌时，要用玻璃棒沿一个方向轻缓搅动C．在析出DNA黏稠物时，要缓缓加蒸馏水，直至溶液中黏稠物不再增加D．在用酒精沉淀DNA时，要使用冷酒精，甚至再将混合液放入冰箱中冷却4《选修1生物技术实践》教学案3．含有DNA的氯化钠（0.015mol/L）溶液中加入二苯胺试剂后，加热煮沸5min，溶液呈A．紫色B．蓝色C．砖红色D．红色4．在“DNA的粗提取实验”中，有两次DNA的沉淀析出，其依据的原理是①DNA在物质的量浓度为0.14mol/L的氯化钠中

8、的溶解度最低②DNA在冷却的体积分数为95％的酒精中能沉淀析出A．