人教版教学课件5.1DNA的粗提取与鉴定.ppt

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1、专题5DNA和蛋白质技术课题1.DNA的粗提取与鉴定1．DNA的溶解性：思考题1：DNA在氯化钠溶液中的溶解度有什么特点？对此有什么应用？DNA在氯化钠溶液中的溶解度，随着氯化钠的浓度的变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为0．14mol/L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出；思考题2：利用什么原理来将DNA与蛋白质分离开？一、实验原理：2．DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性：蛋白酶能水解，但对没有影响。大多数蛋白质不能忍受℃的高温，而DNA在℃以上才会变性。能够

2、瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。3．细胞在中易吸水而导致细胞膜和细胞核膜的破裂，据此可得到含有核DNA的溶液。4．DNA的鉴定：思考题3：依据什么原理来鉴定DNA？三、实验材料：鸡血细胞液思考题4：能否选用牛、羊、马血做实验材料？为什么？不能。因为哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核，仅靠白细胞和淋巴细胞中的少数DNA，在实验中很难提取到。四、实验步骤：1．制备鸡血细胞液：在鸡血中加入质量浓度为0．1g/mL的溶液，离心处理；2．提取鸡血细胞的细胞核物质：向鸡血细胞液中加入蒸馏水，搅拌、过滤；思考题5：加入蒸

3、馏水的目的是什么？为什么能达到此目的？加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA；蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂。3．溶解细胞核内的DNA：加入2mol/L的氯化钠溶液，搅拌，使DNA呈溶解状态；过滤4．析出含DNA的黏稠物：加入蒸馏水，用玻璃棒搅拌；思考题6：此时加入蒸馏水的目的是什么？使氯化钠溶液浓度接近0．14mol/L，使DNA最大限度地析出。5．滤取含DNA的黏稠物：过滤；思考题7：这次过滤与上次过滤的目的一样吗？为什么？不一样；

4、这次过滤是为了去除溶于氯化钠溶液的杂质，而上次过滤是为了去除破裂的细胞膜等物质。6．将DNA的黏稠物再溶解：加入2mol/L的氯化钠溶液，搅拌，使DNA呈溶解状态；7．过滤含有DNA的氯化钠溶液：过滤；思考题8：这一步骤的目的是什么？除去含有DNA滤液中的杂质；思考题9：为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。8．提取

5、含杂质较少的DNA：加入冷却的95%的酒精，搅拌；思考题10：这一步骤的目的是什么？去除溶于酒精的杂质；思考题11：为什么加入的酒精需要冷却的？可抑制核酸水解酶的活性，防止降解DNA；凝集DNA；减少DNA链的断裂。9．DNA的鉴定：取两支试管，各加入0．015mol/L的氯化钠溶液5mL，一支加入提取的DNA，两支各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后置于沸水中加热。思考题12：为什么要设置对照组？实验中能观察到什么现象？确定二苯胺不与氯化钠发生颜色反应；实验组试管中可看到溶液变蓝色本实验中有三次过滤,

6、分别有什么作用?⑴过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液目的:含核物质的滤液⑵过滤含粘稠物的0.14mol/LNaCl溶液目的:纱布上的粘稠物⑶过滤溶解有DNA的2mol/LNaCl溶液目的:含DNA的滤液实验中有五次用玻璃棒搅拌?分别有什么作用?第一次搅拌加蒸馏水的鸡血细胞液加速细胞的破裂第二次搅拌加2mol/LNaCl溶液的滤液使DNA与溶液混合均匀第三次搅拌加蒸馏水至0.14mol/LNaCl溶液稀释NaCl溶液,析出DNA第四次搅拌放入2mol/LNaCl溶液中纱布上的粘稠物使DNA尽可能多的溶于溶液中

7、第五次搅拌体积分数为95%的酒精提取含杂质较少的DNA