枸杞多糖的结构分析及生物活性评价

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1、华中农业大学博士学位论文枸杞多糖的结构分析及生物活性评价姓名：朱彩平申请学位级别：博士专业：食品科学指导教师：张声华20060601华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文是否保密不如需保密，解密时间年月日够独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果．尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，指导教师对此进行了审定．与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意．僦擀：糊干帆州年6月P瓤黼獬：

2、耘；哥’⋯：缎蒡缉签名日期：洲年6月毋日’签名日期：洲牟／多月如1日华中农业大学2006届博士学位论文摘要构杞多糖作为天然多糖中的重要一员，在祖国的中医药中具有特殊的重要地位．本文在前人已有研究的基础上，继续开展枸杞多糖的提取、结构及生物活性的研究，并采用激光扫描共聚焦显微镜、流式细胞仪、原位末端标记等生物学前沿技术从细胞凋亡角度探讨了枸杞多糖的抗肿瘤作用机制，同时提出了枸杞多糖新的分离程序及简便准确测定枸杞子水提物中多糖含量的方法．主要研究结果如下：1枸杞多糖的特性及结构表征作者提出了构杞多糖新的分离程序：枸杞子通过粉碎、提取分离、真空浓缩、脱色、脱蛋白、凝胶渗透色谱、冷冻干燥、纯度监测

3、等程序，获得组分单一的精制枸杞多糖，得率2．21％(W／W)。经检测，上述分离程序得到的精制枸杞多糖中含中性糖45．09％、蛋白质6．98％、半乳糖醛酸46．76％。气相色谱测得枸杞多糖的中性糖由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖，甘露糖、葡萄糖和半乳糖六种单糖组成，其摩尔比例为0．72：5．82：0．52：0．26：1：4．48：由红外光谱图可知：枸杞多糖中含有-COOH，-OH和-NH2或-NH．基团，糖链中含有弘阻吡喃葡萄糖、ct-D．吡喃甘露糖、a-D．吡喃半乳糖；p．消去反应证明多糖链和氨基酸间为．口型连接；刚果红实验表明枸杞多糖不具有三股螺旋结构；碘-碘化钾反应表明枸杞多糖存在较长的侧链和

4、较多的分枝；经扫描电镜观察，枸杞多糖表面呈松散的碎片状聚集态．2枸杞子水提物中多糖含量的测定本文首次提出测定枸杞子水提物中多糖含量的简便方法．以不同溶剂去除枸杞子水提物中的单糖、低聚糖、色素等杂质后，采用苯酚．硫酸法测定多糖含量，测定波长为490nm，多糖换算因子f=3．26；在7～49ttg／mL范围内，其浓度与吸光度线性关系良好，R2_-0．9984；多糖的平均回收率为99．74％，RSD为1．83％(n=6)；测定枸杞子水提物中多糖的含量为3．86％；该方法简便、准确、重现性好，也可作为其它水提物中多糖含量的测定方法．3枸杞多糖与人宫颈癌HeLa细胞凋亡的关系’枸杞多糖具有诱导细胞凋

5、亡的作用。噻唑蓝(MTT)实验证明在添加有枸杞多糖6．25mg／L～100mg／t．的培养液中，人宫颈癌HeLa细胞的增殖受到显著抑制；细胞形态学观察(普通光学显微镜，荧光显微镜、激光扫描共聚焦显微镜、透射电镜)发现，枸杞多糖可诱导HeLa细胞凋亡，细胞呈现典型的凋亡细胞形态；原位末端标记法表明枸杞多糖可使细胞凋亡指数显著提高．流式细胞仅、激光扫描共聚焦显微镜检澳4发现，枸杞多糖能将人宫颈癌HeLa枸杞多糖的结构分折及生物活性评价细胞的增殖过程阻滞于S期，并显著降低线粒体跨膜电位，增加Helm细胞细胞浆内钙离子浓度．同时试剂盒检测结果表明，HeLa细胞培养液中NO含量显著增加、NOS及iN

6、OS活性均显著增强，细胞膜中唾液酸含量显著降低。上述结果预示人宫颈癌HeLa细胞凋亡发生的机制可能与上述因素的变化密切相关．4枸杞多糖对小鼠移植性肝癌的体内抑制作用各组实验小鼠在接种前每天分别以灌胃和腹腔注射两种方式给予枸杞多糖(5mg／kg、10mg／kg、20mg／kg)，连续两周，接种后继续以上述方式用药lO天，均可显著抑制肝癌移植瘤的生长，且以腹腔注射方式用药抑瘤效果更好，当构杞多糖剂量达20mg／kg时，通过腹腔注射给药，对肿瘤的抑制作用与阳性药物环磷酰胺接近，抑瘤率达到73．5％；可显著提高其T淋巴细胞转化能力和NK细胞活性，增强荷瘤小鼠迟发型超敏反应；提高其肝组织中SOD活力

7、，降低MDA含量。提示枸杞多糖对小鼠移植性肝癌的体内抑制作用可能是通过增强荷瘤小鼠的免疫功能和提高机体的抗氧化活性来实现的．5枸杞多糖对高脂血症小鼠血脂的调节作用枸杞多糖对血脂具有明显的调节作用．实验小鼠进行高脂饮食的同时每天以5mg／kg、10m#g和20mg／kg的枸杞多糖灌胃，连续6周后，可有效抑制高脂饮食小鼠体重的快速增长，明显降低实验小鼠血清中TC、TO含量，并可升高HDL-C及I-IDL-CfFC水平，降低L