常规组织病理技术

《常规组织病理技术》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第一章常规组织病理技术病理学是一门研究疾病的病因、发病机制、病理改变（包括代谢、机能和形态结构的改变）和转归的医学基础学科，重点通过对疾病过程中各个器官、组织形态学变化的观察，为临床解决疾病的病理诊断问题。病理学实验研究的方法多种多样，尤其是近十多年来分子生物学技术以及其它高、新技术在病理领域的应用，进一步拓宽了病理工作者的视野，丰富了病理研究工作的内容，也提高了疾病诊断的准确性。但是，无论多少新技术、新方法涌现，病理工作最基本，也是最重要的技术仍然是常规组织病理技术，离开它，一切病理诊断或研究都将无从谈起。本章将简要介绍常规的组织病理技术，包括组织（细胞）取材、固定、包埋、切片、苏

2、木素-伊红染色以及常用的特殊染色方法。第一节组织与细胞的取材病理标本检查包括大体和显微镜下观察两个方面，一张好的切片与组织取材、固定、染色都有密切的关系。正确的取材、合适的固定和良好的染色是优质病理工作的基础。目前，由于免疫组织化学方法已普遍应用于大多数医院病理科和研究单位，而该方法所需的材料，不仅要求组织细胞的形态完整保存，而且要最大程度地保存组织或细胞成分的抗原性。在保证抗原性不受损伤的同时，还要求抗原不弥散，以保证其准确定位。这就对组织的取材和固定提出了更高的要求。任何固定不及时或处理不当的标本，都可能导致产生假阴性或假阳性结果，影响病理诊断的准确性。一、组织取材组织标本主要取

3、之于活检标本、手术切除标本、动物模型标本以及尸体解剖标本等。组织取材的一般原则是：①组织块的厚度为0.2~0.3cm；面积1~1.5cm2，最多不超过2cm2，太大、太厚的组织块常常固定不好；对于冷冻切片，取材组织块可略厚（0.3~0.4cm）；用于免疫组织化学染色的组织块，以1cm×lcm×0.2cm为好，不要太大，以免浪费试剂；②对于皮肤、腔道器官及囊壁组织等应剪成细条，较长时可将其缠绕成同心圆状；③骨组织需先经过脱钙处理；④新鲜组织若1需保存，应将所取组织用锡箔纸包好，放入液氮速冻，然后置于-70℃冰箱中。取材时应注意防止人为因素的影响，如切取组织时应用锋利的刀、剪，避免用钝刀

4、前后拉动或用力挤压组织。应避免使用有齿镊，同时夹取组织时动作应轻柔，不宜过度用力，以免挫伤或挤压组织，引起组织结构的变形。取材时还应避免过多的坏死组织或凝血块，如有线结应拔除。有钙化时，应经脱钙后再取材。组织块上如有血液、粘液、粪便等污物，应先用水冲洗干净再取材。肿瘤标本的取材，应选择肿瘤主体部分、肿瘤邻近组织及其肿瘤两端的切缘分别取材，并应注意切取肿瘤组织与正常组织的交界处。二、细胞取材及制片细胞标本的收集及制片方法有印片法、穿刺法、沉淀法和活细胞标本的制备等：①印片法：常用于活检和手术标本，优点是操作简单，细胞抗原保存好；②穿刺法：常用于淋巴结、软组织、肝、肾和肺等的穿刺标本。穿

5、刺液少时，可直接涂在载片上；穿刺液多或细胞丰富时，可滴入装有l~2mlHanks液或RPMI1640液的试管内，轻轻搅拌后，以500r/min低速离心5~10min，然后涂片；③沉淀法：主要用于胸水、腹水、尿液和脑脊液等体液多而细胞少的标本，一般需离心后将细胞悬液制成细胞涂片；④活细胞标本的制备：多用于科研。标本主要来源于建株的培养细胞、短期培养细胞和外周血等。细胞可直接培养在盖玻片上（细胞爬片），也可培养于培养瓶或培养板内，制成细胞悬液，收集细胞后再进行涂片。第二节固定及常用固定剂将组织浸入某些化学试剂，使细胞内的物质能尽量保持其生活状态时的形态结构和位置，这一过程称为“固定”。组

6、织固定在病理工作中具有重要意义，凡需病理检验的各种组织都需经过固定。由于组织固定不当或不良对标本所造成的影响是无法纠正和弥补的，因此应特别加以注意。固定的作用在于：①保持组织、细胞与生活时相似的结构和形态，防止离体组织自溶和细菌繁殖导致的组织腐败；②保持与定位细胞内特殊的成分，如细胞内的一些蛋白质经过固定，可沉淀或凝固定位在细胞内的原有部位；③便于区别不同组织成分：固定可使组织细胞中各种成分的沉淀凝固并易着色；同时固定后2组织细胞内的不同物质可产生不同的折光率，对染料产生不同的亲和力，因而经染色后容易加以区别；④有利于切片：固定剂兼有组织硬化作用，能使细胞从半液体状（胶体）变为半固体

7、状（凝胶），因此，固定后的组织硬度增加，易于切片；⑤保存抗原及DNA、RNA，特别是准备用于做免疫组化染色和核酸原位杂交的标本，及时而恰当的固定尤其重要。影响固定的因素很多，如组织与固定液的比例、固定时间、固定时的温度等。除此之外，固定剂本身也有一定的影响，如选用不恰当的固定剂会引起细胞内成分如蛋白质、粘多糖、脂类、核酸和低分子量物质不同程度的损失等。因此，组织固定时应注意：1．根据研究目的的不同选择合适的固定剂非常重要。如进行Masson染色，最好用甲醛