实用组织化学技术-常规病理组织学和组织化学(研究生)

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1、实用组织化学技术中国医科大学法医学院张国华细胞化学和组织化学cytochemistryandhistochemistry是以细胞学、组织学为基础，运用物理的和化学的技术方法显示细胞组织结构中各种化学成分，并对这些化学物质进行定性、定位、定量（半定量），从而分析研究生物在生理或病理状态下细胞组织的代谢、机能及形态变化规律。其在医学研究中具有广泛的应用价值。细胞和组织化学方法其原理是运用已知的化学反应过程使细胞组织内的各种化学物质在原位形成可见的最终有色产物。光学显微镜观察－显微镜细胞组织化学电子显微镜观察－电镜细胞化学免疫技术方法－免疫组织化学

2、免疫电镜细胞化学用细胞和组织化学方法显示细胞组织结构中各种酶的定性、定位、定量－酶组织化学酶组织化学－宏观酶组织化学光镜酶组织化学电镜酶组织化学细胞和组织化学方法研究的范围1.组织细胞中的无机物质：主要包括钾、钙、锌、铜、汞等金属；氯化物、磷酸盐等盐类；以及各种无机放射性物质等。2.组织细胞中的有机物质：主要包括中性脂肪、磷脂类、胆固醇、中性和酸性粘多糖类、糖原、粘液蛋白、淀粉、类淀粉物质、黑色素、脂褐素、胆色素、氨基酸、肽、蛋白质、DNA、RNA、各种维生素等。3.组织细胞中各种酶类：如碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、胆碱酯酶、细胞色素氧化酶、琥珀酸

3、脱氢酶、乳酸脱氢酶等--蛋白质。细胞和组织化学方法的设计要求:1.必须最大限度地保存细胞和组织中各种化学成分和/或酶的活性，以保证定性、定量研究；2.必须最有效地保持细胞组织固有的形态结构，以保证化学成分和各种酶在细胞组织中的定位；3.必须掌握被检测的化学物质特性，如水溶性、脂溶性、溶解度及特异反应等；4.必须掌握被检测各种酶的特性，如酶的功能、酶存在的特定部位、酶反应的适宜温度和酸碱度、酶的特异激活剂和抑制剂、影响酶活性的因素等；5.必须做对照实验，借助阳性和阴性对照，正确分析实验结果，注意识别假阳性结果。细胞和组织化学方法的基本技术取材固定水

4、洗脱水透明浸蜡与包埋切片染色:脱蜡、脱苯、水化、染色、脱水、透明封片一、取材基本要求：取材是否正确、恰当，直接影响切片的制作及正确诊断。1．取材越快越新鲜越好，防止组织自溶、腐败。2．取材刀要锋利，切取时刀口垂直地切取；严禁挤压，严禁用钳镊钳夹，以免使组织或细胞变形造成人为的损伤。3．取材大小，一般长l-3厘米，宽1-2厘米，厚度为0.3-0.5厘米。科研用光镜标本不超过1cm×1cm×1cm，电镜标本直径约0.5mm。过大材料在短时间内不易固定透，影响效果。4．要兼顾病变部位与正常部位。5．尽可能在低温条件下操作，0～4℃。各器官取材方法：脑：

5、取材应能反应出脑各部位的变化，一般采用冠状切面法，全脑包括（桥脑、延脑、小脑和脊髓颈段及脉络丛）。取材部位如下：⑴额极；⑵中央前后回；⑶海马；⑷内囊；⑸丘脑；⑹枕叶；⑺脉络丛；⑻中脑；⑼桥脑；⑽延髓；⑾小脑；⑿脊髓颈段。取材时要包括软脑膜、室脑膜或软脊膜（刀要锋利）。垂体：取垂体时注意前、中、后叶和垂体柄都要兼顾，从前向后矢状切。心：一般悄况下将心房、瓣膜、心室一起取下。也可分别取一块病变部位连同正常组织。也可单独取心室肌，乳突肌组织。肺：常规取材应包括左、右两肺（五个肺叶），可根据病变需要决定取材块数，特殊情况下为区别在哪个肺叶上取的材可用形状

6、做标志，在记录时记清楚。肾：取材包括被膜、皮质、髓质和肾盂，并要求区别左、右肾。胰：常规取胰体部，为长方形必要时加取胰头、胰尾。肝：取长方形或三角形均可，带被膜。脾：取材带被膜。管腔脏器：取材时注意方向大、小肠：考虑环行肌肉，沿肠管的长轴取（纵切）；食管：以横切面为宜；胃：常规取材以胃底为好；气管：横切、纵切均要有。总之管腔脏器的各层构造都要取到。为了防止标本入固定液后变形，将材料取下后（如剪开的大小肠、胃等组织）将浆膜面铺在滤纸上，然后入固定液内，这样能防止或减少组织受压变形与收缩。二、组织固定组织固定的意义：组织固定是做好切片的重要步骤之一，

7、如果首次固定失败，再重新固定也不如一次固定成功好，无法补救。迅速将检材固定能有效地防止组织及细胞发生死后的一系列变化。固定的关键在于取材后尽可能地及时地将取到的材料进行固定，抑制其死后变化的进展，尽力使组织接近于生前状态。另外，在标本制做过程中经过许多步骤，为了防止组织成份的溶解消失，有必要及时转变为不溶性物质，从而有利于保存。组织固定的目的：⑴阻止死后变化，防止组织的自溶与腐败。⑵使组织的结构保存下来，如蛋白质，脂肪、糖元、酶等各种成份与生活时的形态相仿。⑶便于染色，同时对组织有媒染作用，使不同的组织成份对染料有不同的亲和力，使细胞各部易于受色

8、。⑷能使组织硬化，为做薄切片打下基础。组织固定的注意事项：⑴检材、标本：①材料块不能过大；②固定器皿不易过小；③固定液量不易过少，大约是