病理组织切片制作技术

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1、《兽医病理解剖学》实验日期：2011.09.13兽医病理解剖学实验前言《兽医病理解剖学》实验部分在本课程教学中占有特殊地位。学生通过观察肉眼和切片标本印证课堂所讲的理论，加强理解，取得感性知识的教学环节。在学习过程中，要求同学初步掌握观察和描述器官组织病变的方法和认识病变。兽医病理解剖学实验实验一病理组织切片制作技术兽医病理解剖学实验目的要求：1、重点掌握病理组织切片的基本制作过程步骤。2、了解病理组织切片制作过程中的注意事项。兽医病理解剖学实验实验内容掌握组织材料的取材、固定、脱水、透明、包埋、切片、烤片、脱蜡、染色及封固的基本操作。兽医

2、病理解剖学实验一、取材及固定（一）取材注意事项：1、材料新鲜2、组织块力求小而薄3、勿使组织块受挤压4、尽量保持组织的原有形态5、熟悉取材部位兽医病理解剖学实验（一）取材注意事项：6、选好组织块的切面7、保持材料的清洁8、切除不需要的部位兽医病理解剖学实验（二）固定及目的：应用化学试剂使组织或细胞中的无机成分和有机成分凝固或沉淀，以保持其生活状态的过程称为固定。兽医病理解剖学实验固定液是10%福尔马林溶液（4%甲醛溶液），固定24小时以上。兽医病理解剖学实验固定的目的1、迅速阻止组织、细胞死后变化，防止自溶与腐败，使之尽量保持生前的状态与结

3、构。2、使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变为不溶性物质，以保持其原有状态。3、使组织内各种物质成分产生不同的折光率，以便染色后易于鉴别和观察。4、使组织块硬化，便于制作薄片。兽医病理解剖学实验固定的注意事项1、组织块不宜大，厚度小于5mm，长宽也应小于15×15mm。2、固定液与组织块的比例应大于10：1。3、软组织或较大组织块可先经2-3小时固定后再修整成小块，重新投入新配制的固定液中继续固定。4、肠道可在浆膜面贴上一层厚纸，以防固定组织变形。兽医病理解剖学实验二、固定后处理及切片(一)、洗涤与修切(二)、脱水与透明脱水：将组织块内

4、水分置换的过程。透明：乙醇和石蜡不互溶，最常用的透明剂是二甲苯。既能溶于脱水剂又能溶于包埋剂（石蜡），透明必须适度。兽医病理解剖学实验50%乙醇30-60min70%乙醇1-2小时或过夜80%乙醇1-2小时95%乙醇1-1.5小时100%乙醇30min100%乙醇20min1：1无水乙醇：二甲苯20min二甲苯10-30min兽医病理解剖学实验(三)、浸蜡与包埋52-58℃石蜡，浸蜡的全过程在60℃的温箱中进行。1：1二甲苯：石蜡30min石蜡一30min石蜡二30min石蜡三30min兽医病理解剖学实验（四）切片、粘片1、切片前处理及切片

5、2、载玻片处理3、粘片（展片）4、烤片兽医病理解剖学实验三、脱蜡和染色（一）、脱蜡1、二甲苯Ⅰ5-10min2、二甲苯Ⅱ1-2min3、1：1二甲苯：乙醇（冬天20min）5min4、无水乙醇、95%、80%、70、50%梯度乙醇每级1-2min5、蒸馏水1-2min兽医病理解剖学实验（二）、染色（HE染色法）6、苏木素染液5～15min7、蒸馏水（洗去多余的染液）8、分色:1%盐酸-70%乙醇分色30-60sec8、蓝化:自来水冲洗（碱化，核蓝色）15-20min9、蒸馏水（洗去多余的碱）1-2min10、逐级入50%、70%、85%乙醇

6、，每级1-2min11、伊红-95%乙醇染液15sec～2min12、95%、无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ逐级脱水，每级1-2min13、1：1无水乙醇：二甲苯、二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ各5min兽医病理解剖学实验四、封固滴加中性树胶，加盖玻片封片。兽医病理解剖学实验五、光镜观察兽医病理解剖学实验