人成纤维细胞稳定转染的方法比较

《人成纤维细胞稳定转染的方法比较》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、四川大学学报(医学版)20∞；39(4)：654—65JSichuanUniv(MedSciEdi)7⋯V，●⋯人成纤维细胞稳定转染的方法比较*芦小燕1’2，解慧琪1，李莉2，智伟2，陈晓禾1，邓力1A1．四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室千细胞与组织工程研究室(成都610041)I2．四川大学华西药学院药理系【摘要】目的采用3种不同的方法将质粒pEGFP—N，转染人成纤维细胞，从中寻找最佳的稳定转染的方法。方法分别采用阳离子聚合物转染、阳离子脂质体转染和电转染方法，将能表达G418抗性蛋白和增强型绿色荧光蛋白(E

2、GFP)的质粒pEGFP—N。转染人成纤维细胞。24h后，荧光显微镜下观察EGFP表达，流式细胞术测定瞬时转染率；通过G418筛选得到稳定转染的细胞。结果电转染有最高的瞬时转染效率(56．8％)，稳定转染得到的阳性克隆最多，且从细胞筛选到扩增至得到阳性大克隆所用的时间也最少(约20d)；用阳离子聚合物瞬时转染率低(1．7％)，稳定筛选同样可以得到阳性大克隆，但是数量很少且从细胞筛选到扩增至阳性大克隆所用的时间也最多(约30d)；阳离子脂质体转染效果居中，瞬时转染率为39．9％，从细胞筛选到扩增至得到阳性大克隆所用的时间

3、约25d。结论用电转染法将质粒pEGFP—N-转染人成纤维细胞是最佳的转染方法。【关键词】人成纤维细胞稳定转染电转染阳离子聚合物转染阳离子脂质体转染【中图分类号】R331StablyTransfectionofDNAtoHumanFibroblasts：AComparativeStudyofThreeApproachesLUXiao-yan，XIEHui-qi。LILi，ZHIWei，CHENXiao—he，DENGLi△．DivisionofStemCellandTissueEngineeting，StateKe，L

4、aboratoryofBiotherapy，westChinaHospital·SichuanUniversity，Chengdu610041，China[Abstract]ObjectiveTosearchforthebestapproachestotransfectplasmidpEGFP-Nlintohumanfibroblasts．MethodsCationicpolymermediatedtransfection。cationicliposometransfeetionandelectrotransfecti

5、onwerecomparedfortransfectingplasmidpEGFP-Nl，aplasmidthatexpressesG418resistanceproteinandEnhancedgreenfuluorescentprotein(EGFP)，intoHumanfibroblasts．TheexpressionofEGFPwasobserved24hoursafterthetransfeetionbyfluorescencemicroscope．Thetransienttransfectioneffici

6、encywasmeasuredbyflowcytometry．ThestabletransfectedcellswerescreenedbyG418．ResultsElectrotransfectionhadthehighesttransienttransfectionefficiency(56．8％)，withthemostmascclonesofstablytransfectionandtheleasttimetakentoformbigmascclones(20days)．Cationicpolymermedia

7、tedtransienttransfectionhadthelowestefficiency(1．7％)，withtheleastmascclonesandthelongesttimetakentoformthebigmascclones(30days)．Cationicliposometransfectionhadatransienttransfectionefficiencyof39．9％andtook25daystoformthebigmascclones．ConclusionElectrotransfectio

8、nisthebestwayofstablytransfectingplasmidpEGFP-Nlintohumanfibroblasts．【Keywords]HumanfibroblastsStabletransfectionElectrotransfectionCationicpolymermediatedtransfectio