各种转染试剂的中文转染方法

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1、各种转染试剂的中文转染方法FuGENE6（Roche）转染步骤：转染前一天将细胞分至培养板，转染当天细胞应50-80％融合。将细胞以1-3×105/2ml接种于6孔板后孵育过夜将达到如此密度。将FuGENE6Reagent在室温孵育10-15分钟。使用之前将FuGENE6颠倒混匀一下。1.在PCR管中加入不含血清和双抗的营养液以稀释FuGENE6，直至总体积到100ul。2.将3-6ulFuGENE6Reagent直接加入营养液，轻弹管壁混合。3.加入1-2ug的DNA溶液（0.02－2.0ug/ul），轻弹管壁混合

2、。4.室温孵育20分钟。5.将6孔板中的旧营养液吸出，加入约1ml不含血清和双抗的营养液洗涤一次，再加入2ml不含血清和双抗的营养液。6.将转染复合物加入细胞，混匀使之均匀分布。7.3-8小时后，加入血清或换成含血清的营养液。 Lipofectamine2000(Invitrogen)转染试剂转染步骤（6孔板）：1.转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90-95％。细胞铺板在2ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。2.对于每孔细胞，使用250ul无血清培养基（如OPTI-MEMI培养基）

3、稀释4.0ugDNA，轻轻混匀。3.使用前将Lipofectamine2000转染试剂轻轻混匀，用250ul无血清培养基（如OPTI-MEMI培养基）稀释10ulLipofectamine2000转染试剂，轻轻混匀。Lipofectamine2000稀释后，在5分钟内同稀释的DNA混合（<30分钟）。NOTE：若使用DMEM培养基，则需在5分钟内同稀释的DNA混合。4.混合稀释的DNA（第二步）和稀释的Lipofectamine2000（第三步）。室温放置20分钟。5.（optional）将6孔板中的旧营养液吸出，用

4、无血清培养基清洗两次。加入2ml无血清配养基。6.直接将复合物加入到每孔中，摇动培养板，轻轻混匀。7.在37℃，5％CO2中保温24-48小时。无需去掉复合物或更换培养基。或者在4-5小时后更换培养生长基也不会降低转染活性。8.在细胞中加入复合物24-72小时后，分析细胞抽提物或进行原位细胞染色，检测报告基因活性。这依赖于细胞类型和启动子活性。对稳定表达，在开始转染一天后将细胞传代至新鲜培养基中，两天后加入筛选抗生素。进行稳定表达需要数天或数周。贴壁细胞的稳定转染：转染后24小时，将细胞以≥1:10的比例传代至新鲜培

5、养基中，次日加入选择性培养基。 Lipofectamine2000转染试剂转染步骤（24孔板）：1.转染前一天，胰酶消化细胞并计数（0.5-2×105），细胞铺板，使其在转染日密度为90-95％。细胞铺板在0.5ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。2.对于每孔细胞，使用50ul无血清培养基（如OPTI-MEMI培养基）稀释0.8-1.0ugDNA，轻轻混匀。3.使用前将Lipofectamine2000转染试剂轻轻混匀，用50ul无血清培养基（如OPTI-MEMI培养基）稀释1-3ulLipofectamin

6、e2000转染试剂，轻轻混匀。Lipofectamine2000稀释后，在5分钟内同稀释的DNA混合（<30分钟）。NOTE：若使用DMEM培养基，则需在5分钟内同稀释的DNA混合。4.混合稀释的DNA（第二步）和稀释的Lipofectamine2000（第三步）。室温放置20分钟。5.（optional）将24孔板中的旧营养液吸出，用无血清培养基清洗两次。加入0.5ml无血清配养基。6.直接将复合物加入到每孔中，摇动培养板，轻轻混匀。7.在37℃，5％CO2中保温24-48小时。无需去掉复合物或更换培养基。或者在4

7、-5小时后更换培养生长基也不会降低转染活性。8.在细胞中加入复合物24-72小时后，分析细胞抽提物或进行原位细胞染色，检测报告基因活性。这依赖于细胞类型和启动子活性。对稳定表达，在开始转染一天后将细胞传代至新鲜培养基中，两天后加入筛选抗生素。进行稳定表达需要数天或数周。贴壁细胞的稳定转染：转染后24小时，将细胞以≥1:10的比例传代至新鲜培养基中，次日加入选择性培养基。 EffecteneTransfectionReagent(Qiagen)转染步骤：以下步骤适用于在6孔培养板中转染贴壁细胞。开始时，每6孔培养板使用

8、0.4ugDNA。尽管DNA的量看起来很少，但已足够用于转染。如果想获得最高的转染效率，对每种细胞系的转染条件都要进行优化。1.转染前一天，用5ml含血清和抗生素的培养基分装使每6孔培养板含2-8×105的细胞（根据细胞类型而定）。2.在细胞的正常培养条件下培养（通常37℃和5％CO2）。转染当天细胞应40-80％融合。3.转染时，用DNA浓缩