tcf-4在肺癌中高表达并与肺癌的进展有关

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1、http://www.paper.edu.cn1TCF-4在肺癌中高表达并与肺癌的进展有关杨连赫，徐洪涛，刘洋，赵月，苗原，杨志强，刘楠，王恩华中国医科大学基础医学院病理学教研室，沈阳(110001)E-mail：wangeh@hotmail.com摘要：背景与目的T细胞因子4（Tcellfactor-4，TCF-4）是Wnt信号传导通路的重要分子，但其mRNA及蛋白在肺癌组织及细胞系中的表达情况和意义的相关研究较少。本研究的目的是检测TCF-4在肺癌组织和细胞系中的表达情况，并探讨其与肺癌的临床病理因素和生物学行为的关系。方法采用免疫组织化学（S-P法）检测120例肺鳞癌和肺腺癌患者及1

2、0例癌旁正常肺组织中TCF-4的表达；应用免疫荧光法检测肺癌细胞系及HBE（人正常支气管上皮）细胞系中TCF-4的表达水平及亚细胞定位；应用RT-PCR方法检测九种肺癌细胞系中TCF-4mRNA的表达水平。结果在120例肺鳞癌和肺腺癌组织标本中，96例为TCF-4高表达（80.0%），其中包括37例同时有细胞浆和核表达（30.8%）。TCF-4的高表达水平与患者的TNM分期正相关（P=0.022），10例癌旁正常肺组织无TCF-4表达。免疫荧光显示TCF-4蛋白在正常支气管上皮细胞系中表达极弱，而在肺癌细胞系中则出现明显的表达，主要定位于细胞核。TCF-4的mRNA在不同组织学类型的肺癌细

3、胞系中的表达并不一致，巨细胞癌细胞系中相对较高，而腺癌细胞系中表达较低。结论TCF-4的高表达与肺癌的进展密切相关。关键词：T细胞因子4，肺癌，TNM分期，免疫组织化学，免疫荧光中图分类号：R361[1]Wnt信号传导通路是一种对胚胎发育起重要作用的信号传导途径，而其不恰当的激活[2]参与了多种人类癌症的发病过程。此通路在结直肠癌，胃癌，肝细胞癌中都起着重要作用。T细胞因子(TCF)/淋巴增强因子(LEF)是Wnt信号传导通路的主要信号分子。TCF/LEF家族包括LEF-1、TCF-1、TCF-3、TCF-4。其中TCF-4是Wnt信号传导通路的一个重要的分子，[3]并且在肿瘤的发生过程中

4、起重要作用。Wnt信号传导通路的激活需要β-catenin在细胞核内的聚集，并且与TCF-4结合形成复合物，此复合物可以诱导一些靶基因的转录，如c-myc、cyclinD1、血管内皮生长因子（VEGF）等，而这些靶基因的激活对肿瘤细胞的增值、去分化、侵袭、转移等都起重要作用。已有研究表明在结肠癌、乳腺癌、结直肠癌中TCF-4的[4][5]表达水平都很高，但是TCF-4在肺癌中的表达情况却报道很少，且样本例数较少。因此本研究采用120例的大样本肺癌组织标本，检测TCF-4在肺癌组织中的表达水平，及其与肺癌临床病理因素的关系，同时检测TCF-4蛋白和mRNA在多种肺癌细胞系中的表达和定位，深入

5、研究TCF-4与肺癌发生发展的关系。1材料和方法1.1材料120例肺鳞癌和肺腺癌标本及10例癌旁正常肺组织标本来自1999-2006年于中国医科大学附属第一医院行肺癌切除手术的患者。患者术前均未接受放化疗。患者平均年龄58岁（20-81岁），其中男性79例，女性41例。肺癌标本根据世界卫生组织2004年的分类标准分为鳞癌54例，腺癌66例；其中高分化27例、中分化43例、低分化50例。68例有淋巴结转移，依据国际抗癌联盟（UICC）1997年修订的肺癌P-TNM分期标准：Ⅰ期47例，1本课题得到国家自然科学基金(30670917)和教育部博士点基金(20040159008)资助。-1-ht

6、tp://www.paper.edu.cnⅡ期18例，Ⅲ期49例，Ⅳ期6例。9种肺癌细胞系分别为：肺巨细胞癌细胞系BE1；肺大细胞癌细胞系NCI-H460（以下简称为460）和NCI-H661（以下简称为661）；肺鳞癌细胞系QG56和SK-MES-1（以下简称为SK）；肺腺癌细胞系A549、LTEP-α-2（以下简称为LTE）和SPC-A-1（以下简称为SPC）；肺小细胞癌细胞系NCI-H446（以下简称为446）。以人正常支气管上皮细胞系HBE为正常对照。每种细胞都用含10%的胎牛血清的1640培养基，PH值保持在7.2-7.4之间，于含0.5%CO2的37℃孵箱内培养。TCF-4兔抗

7、人多克隆抗体购自美国SantaCruz生物技术公司；SP超敏免疫组织化学试剂盒（KIT-9710）和DAB酶底物显色试剂盒（DAB-0031）购自福州迈新生物技术公司；Trizol试剂购自美国Invitrogen公司；RT-PCR试剂盒TaKaRaRNAPCRKit(AMV)Ver.3.0购自大连宝生物（TaKaRa）公司。1.2方法1.2.1免疫组织化学所有切除标本均用10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，制成4µm切片，