984-不同培养条件下发芽水稻α淀粉酶活力及粘度变化与在线粘度计(黏度-水稻发芽培养-变性淀粉)

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1、万方数据辽宁农业科学2009(3)：35—37LiaoningAgriculturalSciences文章编号：1002—1728(2009)03—0035—03不同培养条件下发芽水稻0／．一淀粉酶活力及粘度变化丰明，王旭达，安家彦(辽宁省农业科学院大连生物技术研究所，辽宁大连116000)摘要：对水稻进行浸泡发芽培养。使水稻分子内部构象发生改变，达到变性目的，测定变性淀粉(It一淀粉酶活力的变化，选择最佳浸泡发芽条件并测定变性后淀粉的粘度。结果表明，选择在25℃，浸泡4h断水10h，加碱量为0．03％Ca(ou)：

2、的条件下培养60h，然后在25℃下发芽6d，n-淀粉酶活性最高，粘度较好。关键词：水稻发芽培养；n一淀粉酶；变性淀粉；粘度中图分类号：s511．Ol文献标识码：B目前，国内外主要是通过物理、化学或酶法处理，在淀粉分子上引入新的官能团或改变淀粉分子的大小和淀粉颗粒的性质来制备变性淀粉。本实验采用将水稻天然发芽的方法制备变性淀粉，特点为水稻发芽的自身的天然作用对自然环境影响小，并测定一些变性淀粉的理化指标，因此本论文选题在该领域还是比较创新的，并为今后更深入的研究变性淀粉提供一些参考意见。1材料和方法1．1实验原料国产优

3、良水稻1．2主要试剂与仪器可溶性淀粉，碘液，氢氧化钙，碳酸钠，pH5．6NaAc—HAc缓冲液，电热恒温干燥箱，电热恒温培养箱，721分光光度计，粉碎机，毛细管粘度计，比重计，离心机，恒温水浴锅。1．3实验方法1．3．1淀粉酶液的制备方法称取发芽后水稻10．0g，加入NaAc—HAc缓冲液100ml，40℃下搅拌(100r／min)，保温1h，用滤纸过滤，弃去初滤液20ml，以后滤液留测定时使用。1．3．2d一淀粉酶活力测定方法取1．5ml1．33％的可溶性淀粉(称取1．33g可溶性淀粉，加100mlpH5．6的Na

4、Ac—HAc缓冲液，加热至通明，冷却定容至100m1)60℃保温·收稿日期：2009—02—115min，加入0．5ml酶液，60℃反应10min，去反应液0．1ml，加10ml碘液，(1ml(0．2moL／L12+5％KI)+lOml6mol／LHCI+300ml蒸馏水)680nm测吸光值。参比液以0．5ml蒸馏水代替酶液。空白试验为取0．1ml蒸馏水加10ml碘液，680nm测吸光值。酶活力单位定义：上述条件下，1min能使淀粉碘液吸光度下降10％为一个酶活力单位(U)。酶活力单位计算公式为d一淀粉酶(U／g干麦

5、芽)=400×(ODl一OD2)1——面广×n×F五式中：OD，——参比吸光值；OD：——样品吸光值；髫——水分含量；n——稀释倍数1．3．3淀粉粘度测定方法取0．5g变性淀粉加入20ml蒸馏水沸水浴加热20min后立即加水稀释至100ml，于25℃水浴中保温10min，测量粘度计在25℃水浴条件下测淀粉溶液溶出时间。测四组数值取平均值t淀粉，使误差小于0．5％，计算得到淀粉的运动粘度P，在25℃下淀粉溶液的相对密度P，以公式弘=y×P计算淀粉粘度。2结果与讨论2．1不同浸泡条件对水稻变性淀粉酶活性的影响由极差分析可

6、以得出25℃，浸2h断水8h，万方数据·36‘辽宁农业科学2009年加入0．03％的Ca(OH)，时a一淀粉酶酶活性应最高，但是由方差显著性分析可以看出，浸泡温度对d．淀粉酶酶活性具有显著影响，浸泡加碱量对n·淀粉酶酶活性也有影响，但不如温度因素显著，因此从温度的工业实现化角度综合考虑，选择浸泡温度25℃，加入0．03％的Ca(OH)：，而浸泡方式对a一淀粉酶酶活性影响很微弱，可以看出仪一淀粉酶在浸泡过程中对需氧量的要求并不高，可以忽略其影响，为了方便安排实验选择浸4h断水10h的浸泡方式可以尽可能避免夜间实验操作。

7、2．2不同发芽条件对水稻变性淀粉酶活性的影响由不同发芽条件的d一淀粉酶酶活方差分析表可以方便看出，发芽温度和发芽时间都对仅·淀粉酶酶活起高度显著影响，水稻在发芽前的浸泡时间对a．淀粉酶酶活也有一定的影响，但是不如发芽温度和发芽时间显著，加之在实验室中进行发芽培养时低温控制不容易实现，所以选择比较容易控制的25℃作为发芽培养时的温度，发芽时间选择6d，此时水稻发芽率较高，为了方便实验时间安排，选择浸泡2．5d后进行发芽培养，此时酶活力达到最佳。表1浸泡条件下廿淀粉酶酶活正交实验极差分析11(20)1(浸4断8)1(O％

8、)15．432l2(浸4断lO)2(0．015％)213．30313(浸2断8)3(0．03％)316．4042f15)1235．6852318．26623l24，2573(25)13229．768321315．15932125．33均值I(X104)11．7113．628．2813．00均值2(×104)6．0612．2414．7715．77