食品微生物检验技术gb4789.2-2010 菌落总数测定

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1、GB4789.2-2010食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定一、设备和材料二、培养基和试剂三、检验程序四、操作步骤五、结果与报告除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：(1)恒温培养箱：36℃±1℃，30℃±1℃。(2)冰箱：2℃～5℃。(3)恒温水浴箱：46℃±1℃。(4)天平：感量为0.1g。(5)均质器。(6)振荡器。(7)无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。(8)无菌锥形瓶：容量250mL、500mL。(9)无菌培养皿：直径90mm。(10)pH计或pH比色管或精密pH试纸。(11)放大镜或/和菌落计数器

2、。一、设备和材料二、培养基和试剂1.平板计数琼脂（PCA）培养基(1)成分:胰蛋白胨5.0g酵母浸膏2.5g葡萄糖1.0g琼脂15.0g蒸馏水1000mlpH7.0±0.2(2)制法:将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH，分装试管或锥形瓶，121℃高压灭菌15min。2.磷酸盐缓冲液(1)成分:磷酸二氢钾（KH2PO4）34.0g蒸馏水2500mlpH7.2(2)制法:贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾于500ml蒸馏水中，用大约175ml的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH，用蒸馏水稀释至1000ml后贮存于冰箱。稀释液：取贮存液1.25ml，用蒸馏水稀释至1000ml，分装于适宜容

3、器中，121℃高压灭菌15min。3.无菌生理盐水(1)成分:氯化钠8.5g蒸馏水1000ml(2)制法:称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。三、检验程序检样25g(ml)样品+225ml稀释液，均质10倍系列稀释选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液，各取1ml分别加入无菌培养皿内每个皿中加入15ml~20ml平板计数琼脂培养基，混匀培养计数各平板菌落数计算菌落总数报告四、操作步骤1.样品的稀释(1)固体和半固体样品：称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min~2min，或放入盛

4、有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。(2)液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。(3)用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。(4)按(3)操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。(5)根据对样品污染状

5、况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。(6)及时将15mL～20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。2.培养(1)待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48h±2h。水产品30℃±1℃培养72h±3h。(2)如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4mL），凝固后翻转平板，按36℃±1℃培养4

6、8h±2h（水产品30℃±1℃培养72h±3h）条件进行培养。3.菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-formingunits，CFU）表示。(1)选取菌落数在30CFU～300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。(2)其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘

7、以2，代表一个平板菌落数。(3)当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。五、结果与报告1.菌落总数的计算方法(1)若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）样品中菌落总数结果。(2)若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式（1）计算:式中：N——样品中菌落数C——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落