GB4789.2-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定.pdf

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1、中华人民共和国国家标准GB4789.2—2010食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定NationalfoodsafetystandardFoodmicrobiologicalexamination：Aerobicplatecount2010-03-26发布2010-06-01实施中华人民共和国卫生部发布GB4789.2—2010前言本标准代替GB/T4789.2-2008《食品卫生微生物学检验菌落总数测定》。本标准与GB/T4789.2-2008相比，主要修改如下：——修改了标准的中英文名称；——修改了菌落总数计算公式中的

2、解释；——修改了培养基和试剂；TM——删除了第二法菌落总数Petrifilm测试片法。本标准的附录A是规范性附录。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：——GB4789.2-1984、GB4789.2-1994、GB/T4789.2-2003、GB/T4789.2-2008。IGB4789.2—2010食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定1范围本标准规定了食品中菌落总数（Aerobicplatecount）的测定方法。本标准适用于食品中菌落总数的测定。2术语和定义2.1菌落总数aerobicplatecount食品检样经过

3、处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。3设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1恒温培养箱：36℃±1℃，30℃±1℃。3.2冰箱：2℃～5℃。3.3恒温水浴箱：46±1℃℃。3.4天平：感量为0.1g。3.5均质器。3.6振荡器。3.7无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。3.8无菌锥形瓶：容量250mL、500mL。3.9无菌培养皿：直径90mm。3.10pH计或pH比色管或精密p

4、H试纸。3.11放大镜或/和菌落计数器。4培养基和试剂4.1平板计数琼脂培养基：见附录A中A.1。4.2磷酸盐缓冲液：见附录A中A.2。1GB4789.2—20104.3无菌生理盐水：见附录A中A.3。5检验程序菌落总数的检验程序见图1。检样25g(mL)样品+225mL稀释液，均质10倍系列稀释选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液，各取1mL分别加入无菌培养皿内每皿中加入15mL～20mL平板计数琼脂培养基，混匀36℃±1℃48h±2h培养计数各平板菌落数计算菌落总数报告图1菌落总数的检验程序6操作步骤6.1样品的稀释6.1.1固

5、体和半固体样品：称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。6.1.2液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。2GB4789.2—20106.1.3用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL

6、稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。6.1.4按6.1.3操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。6.1.5根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。6.1.6及时将15mL～20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基

7、（可放置于46±1℃℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。6.2培养6.2.1待琼脂凝固后，将平板翻转，36±1℃℃培养48h±2h。水产品30±1℃℃培养72h±3h。6.2.2如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4mL），凝固后翻转平板，按6.2.1条件进行培养。6.3菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-formingunits，CFU）表示。6.3.1选取菌落数在30C

8、FU～300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。6.3.2其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长