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1、中华人民共和国国家标准GB4789.2—2016食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定2016-12-23发布2017-06-23实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布国家食品药品监督管理总局GB4789.2—2016前言本标准代替GB4789.2—2010《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》。ⅠGB4789.2—2016食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定1范围本标准规定了食品中菌落总数(Aerobicplatecount)的测定方法。本标准适用于食品中菌落总数
2、的测定。2术语和定义菌落总数aerobicplatecount食品检样经过处理,在一定条件下(如培养基、培养温度和培养时间等)培养后,所得每g(mL)检样中形成的微生物菌落总数。3设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:3.1恒温培养箱:36℃±1℃,30℃±1℃。3.2冰箱:2℃~5℃。3.3恒温水浴箱:46℃±1℃。3.4天平:感量为0.1g。3.5均质器。3.6振荡器。3.7无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。3.
3、8无菌锥形瓶:容量250mL、500mL。3.9无菌培养皿:直径90mm。3.10pH计或pH比色管或精密pH试纸。3.11放大镜或/和菌落计数器。4培养基和试剂4.1平板计数琼脂培养基:见A.1。4.2磷酸盐缓冲液:见A.2。4.3无菌生理盐水:见A.3。5检验程序菌落总数的检验程序见图1。1GB4789.2—2016图1菌落总数的检验程序6操作步骤6.1样品的稀释6.1.1固体和半固体样品:称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000r/min~10000r/m
4、in均质1min~2min,或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2min,制成1∶10的样品匀液。6.1.2液体样品:以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1∶10的样品匀液。6.1.3用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1∶10样品匀液1mL,沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其2GB4789.2
5、—2016混合均匀,制成1∶100的样品匀液。6.1.4按6.1.3操作,制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用1次1mL无菌吸管或吸头。6.1.5根据对样品污染状况的估计,选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行10倍递增稀释时,吸取1mL样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。同时,分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。6.1.6及时将15mL~20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基(可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动
6、平皿使其混合均匀。6.2培养6.2.1待琼脂凝固后,将平板翻转,36℃±1培养48h±2h。水产品30℃±1℃培养72h±3h。6.2.2如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约4mL),凝固后翻转平板,按6.2.1条件进行培养。6.3菌落计数6.3.1可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony-formingunits,CFU)表示。6.3.2选取菌落数在30CFU~300C
7、FU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数,大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。6.3.3其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落数。6.3.4当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。7结果与报告7.1菌落总数的计算方法7.1.1若只有一个
8、稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每g(mL)样品中菌落总数结果。7.1.2若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时,按式(1)计算:?CN=……………………(1)(n)d1+0.1n2式中:N———样品中菌落数;?C———平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和;n1———第一稀释度(低稀释倍数)平板个数;n2———第二稀释度(高稀释倍数)平板个数;d———稀释因子(第一稀释度)。示例:稀释度1∶100(第一
