细胞培养技术及相关产品.pdf

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1、细胞培养的技巧及相关产品选择牛新乐赛默飞世尔实验室产品部Thermo与细胞培养相关的产品FormaRevcoHeraeusHamiltonHypersilSorvall2细胞在体外的生长ACBDEFGHI3细胞培养流程及相关的仪器设备和耗材收获扩增鉴定冻存准备分化分析运输仪器设备•生物安全柜•高通量筛选•离心机•二氧化碳培系统（核心：二氧化碳培养•磁珠分选仪养箱•读板仪箱）•二氧化碳培养箱•纯水仪•洗板仪•纯水仪•水浴槽•摇床/孵箱•冰箱•液氮罐•离心机•离心机•冰箱/冰柜•冰箱•程序降温仪耗材和•冻存管/盒

2、移液产品•程序将温盒•OptiCell（核心：培养瓶）•移液枪/枪头•移液器/移液管•离心管•培养瓶/皿/板•过滤器•移液枪/枪头•培养板•移液器/移液管•移液枪/枪头•细胞工厂•移液器/移液管•离心管•腔室载（盖）玻片•离心管•插入式培养器4ThermoRestricted无菌操作环境•细胞感染的种类及抗生素的局限性•感染种类及鉴别方法：细菌、真菌、支原体、病毒•抗生素的局限性•生物安全柜•连续稳定层流气流保持无菌环境，同时保护样品和操作者•尽量减少容器在空气中敞开的时间，提倡单手操作，尽量使用移液管转移液

3、体避免容器间直接倾倒•使用前及使用后用酒精擦拭表面积挡风窗，放入物品前尽量用酒精擦拭或喷洒，操作前用酒精擦洗手套•安全柜内紫外灭菌的局限性及保持安全柜连续工作的重要性•尽量减少操作过程中反复带入物品，常用物品尽量保留在安全柜内•独立的细胞培养室对保持无菌环境的重要性•环境灭菌•高温》酒精》紫外线•水浴槽的污染防护•勤换水；取出容器时应擦干后再用酒精擦拭；放入的容器宜用酒精擦拭；使用银离子盒或其它抑菌试剂5细胞来源•从固体组织提取细胞•酶解法（胰酶/EDTA、胶原酶、离散酶、透明质酸酶）•细胞活性易受损，但收获

4、率较高、所需时间短、生长时间较均一•贴壁法•细胞活性保持的好，但收获率低、所需时间长、生长时间不均一•从液体组织中提取•梯度离心分选：简易分离细胞大小差别较明显的细胞•流式分选：深度分选带有不同便面特征蛋白的细胞；注意保护筛选后细胞•从厂商、机构和其他实验室获取•连续传代细胞（如肿瘤细胞、胚胎干细胞等）•有限传代细胞（如原代细胞等）•相关产品•离心管•重要参数：最大离心率、密闭性、单手开启的便捷程度、材质吸附程性等•高速离心时样品量不宜超过离心管容积的三分之二；•养成严格平衡的习惯•离心机•重要参数：容量、通

5、用性、加速/减速时间、自动平衡、噪音、温度控制、可靠性等•普通哺乳动物细胞150-200g（1000RPM）5-6分钟6细胞培养器皿：悬浮细胞/微生物培养瓶•普通或专用细胞培养瓶/皿/板•表面未处理过的悬浮细胞培养瓶/皿/板•表面未处理过的悬浮细胞培养瓶/皿/板•适用于实验室小规模培养•一次性无菌PETG锥形瓶•可使用带滤膜通气盖•透明•平底或易固定底•125ml-2800ml•可重复使用聚碳酸酯三角瓶•可高温高压灭菌•透明、机械强度高，不易碎•与玻璃瓶细菌生长曲线一致，可替代玻璃瓶•可配不锈钢盖、塑料盖或橡

6、胶塞•50ml-2800ml7细胞培养器皿表面细胞培养定制化包被标准包被表面UpCell温敏表面细胞培养处理表面未处理表面LowCellBinding超低吸附表面8细胞培养器皿：贴壁细胞培养面积0.013cm225000cm2线性放大ResearchBioproduction9贴壁细胞培养器皿的应用区别特点：不易污染，但培养成本较高，操作较为费事特点：大量或长时间培养容易污染，但多样本操作方便。适用于：连续传代和扩增及重要细胞培养。适用于：同时检测处理多个样本，如InCellWestern、克隆挑选，高通量筛

7、选等。培养瓶培养板特点：大量或长时间培养容易污染，但培养成本较低，操作较为方便。适用于：生长或扩增一些试验后可以丢弃的细胞。培养皿三层培养瓶细胞工厂10ThermoRestricted贴壁培养器皿的表面处理NunclonΔ(%)100电晕或等离子体电晕处理等离子体处理聚苯乙烯间壁性区贴优胞最细0亲水疏水Atom%C-OC=OORO-C-OO-C=OCOOOPlasma151175Corona8520UV12110Gamma300011ThermoRestricted贴壁培养器皿的表面处理10%胎牛血清5%胎牛

8、血清HEL-2991%胎牛血清Nunclon-DBBrand细胞贴壁性:Nunc>Bbrand>Cbrand>Sbrand12ThermoRestrictedNunc细胞培养瓶的特色Nunc•不同的材料表面处理工艺，细胞贴壁生长的好•瓶盖设计独特•开关只需旋转半圈•透气/密闭式透气位置有明确标志•移液管或细胞刮刀可以触及培养底面所有位置，方便收获细胞（尤其是25cm培养瓶）。•平放时瓶口位置较高，使