嗜酸乳杆菌表面疏水性对其亚油酸异构酶酶活的影响-论文.pdf

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1、第29卷第2期安徽工程大学学报Vo1．29．No．22014年6月JournalofAnhuiPolytechnicUniversityJun．，2014文章编号：16722—477(2014)02—0005—04嗜酸乳杆菌表面疏水性对其亚油酸异构酶酶活的影响丁锡龙，魏明，薛正莲，赵世光(安徽工程大学生物与化学工程学院，安徽芜湖241000)摘要：研究碳源、氮源、生长时间以及生长温度对嗜酸乳杆菌细胞表面疏水性及其亚油酸异构酶酶活力的影响．通过Minitab15软件进行嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶酶活力对

2、其表面疏水性的回归分析，结果表明，嗜酸乳杆菌菌体表面疏水性与其亚油酸异构酶酶活成正相关关系，回归方程为：y一1．5500x+78．163．R一0．7507说明模型有较高的拟合度，显著性分析P(0．003)

3、高骨骼密度及防治糖尿病等多种重要生理功能，对于高血压、心脏病、糖尿病和癌症的防治有着重要意义[1q]．乳酸杆菌含有亚油酸异构酶[4]，能把亚油酸催化成共轭亚油酸Is]，一般采用酶提取法，即通过物理的方法破碎菌体从而得到亚油酸异构酶，但是这样影响酶的天然活性及催化效率．利用全细胞转化亚油酸能保持酶的天然活性，但是细胞膜成为底物亚油酸和产物进出细胞的障碍，为生物转化造成困难．本研究以嗜酸乳杆菌为研究对象，通过其表面疏水率来确定影响嗜酸乳杆菌表面疏水性的因素，并探讨嗜酸乳杆菌表面疏水性与其亚油酸异构酶酶

4、活之间的关系，为进一步提高全细胞催化亚油酸为共轭亚油酸的效率提供新的思路和理论根据．1材料与方法1．1材料与仪器(1)主要试剂与培养基．嗜酸乳杆菌(Lactobacillus．acidophilus)由安徽工程大学实验室209保藏，MRS培养基按文献[6]制备：葡萄糖，蛋白胨，牛肉膏，酵母膏，七水硫酸钠，四水硫酸锰，乙酸钠，吐温一80，磷酸氢二钾，柠檬酸氢二铵，琼脂；二甲苯，磷酸二氢钾均为分析纯，国药集团化学有限公司．(2)主要仪器与设备．8O一2离心机(江苏省金檀市华容仪器有限公司)，Sp-75

5、4紫外可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司)，JK3OO—DB超声波清洗器(合肥金尼克机械制造有限公司)，FC-104电子分析天平(上海佑科仪器有限公司)，GHP一9050隔水式电热恒温培养(上海一恒仪器有限公司)，SYQ-DSX-280A手提式压力蒸汽灭菌锅(上海申安仪器有限公司)．1．2实验方法(1)嗜酸乳杆菌的培养．用100mL三角瓶装6OmLMRS培养基，接入1的菌种，37℃培养36h．(2)菌体重悬液制备．将菌悬液以4000r／min，离心15min，收集菌体，用磷酸盐缓冲液[7洗涤菌体

6、2次．以磷酸盐缓冲液为空白对照，并用磷酸盐缓冲液调整质量浓度，使其在分光光度计600am波长下OD值为0．6±0．02．(3)菌体表面疏水率的测定．取4mL调整质量浓度后的菌液加入200uL二甲苯，对照组不加，该两相体系通过涡旋彻底混合60S，静置15min分层．取水相，以磷酸盐缓冲液为空白对照，测量A60O值．计算公式：疏水率()=(对照组A600一试验组A6o0)／对照组A600×100．每组平行做10管，分别记录OD收稿日期：2013—11-22基金项目：安徽省高校省级自然科学基金资助项目(

7、KJ2008B025，2OllAO37)作者简介：丁锡龙(1988一)，男，安徽休宁人，硕士研究生．通讯作者：魏明(1969一)，男，安徽合肥人，副教授，硕导．·6·安徽工程大学学报第29卷值，进行5次独立实验．采用微生物黏着碳氢化合物法(BacteriaAdhesionToHydrocarbons，BATH)L8]，通过试验菌株对碳氢化合物的亲和力反映菌株表面的疏水性，来测定嗜酸乳杆菌细胞表面疏水率．(4)亚油酸异构酶酶活的测定．酶活单位的定义：在上述条件下，1rain生成1ug共轭亚油酸所需要

8、的酶量为1个酶活单位U，这里以U／g湿细胞表示．取10mL菌体重悬液于50mL三角瓶当中，滴加亚油酸至0．5mg／mL，于37℃，120r／rain振荡培养箱中反应3h．然后加入正己烷2OmL萃取共轭亚油酸；离心之后取正己烷层，在233nm处用紫外分光光度计测其吸光值，对照共轭亚油酸标准曲线可求得共轭油酸含量，共轭亚油酸标准曲线为：Y：10．2x一0．69，R：0．998．(5)数据统计分析．利用Minitab15软件进行嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶酶活力对其表面疏水性的回归分析，采用的