大鳞副泥鳅β-actin 基因近端启动子的克隆及启动活性分析-论文.pdf

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1、第44卷第4期淡水渔业2014年7月Vo1．44No．4FreshwaterFisheriesJu1．2014大鳞副泥鳅D—actin基因近端启动子的克隆及启动活性分析李相赫，徐琪，俞钦明，童一宇，先友成进，陈国宏(1．朝鲜金亨稷师范大学生命科学系，平壤99903；2．扬9'I'I大学动物科学与技术学院，江苏扬州225009；3．朝鲜金日成综合大学平壤农业大学，平壤99903)摘要：采用PCR技术从大鳞副泥鳅(Paramisgurnusdabryanus)基因组中克隆了3-actin基因近端启动子片段DPRK1，并将

2、该基因启动子片段DPRK1定向亚克隆到不含启动子的绿色荧光表达载体pEGFP—N1中，构建了重组荧光表达载体pDPRK1一EGFP。将该载体分别转染真核细胞293T、CEL及DF1，检测绿色荧光表达情况。重组载体经Ndel酶切线性化后，显微注射到斑马鱼(Daniorerio)的受精卵中。序列分析显示该片段的长度为1282bp，含167bp的5侧翼序列近端启动子区和共1115bp的第1个外显子以及第1个内含子区。5侧翼序列近端启动子含有CAATbox，CArGmotif和TATAbox，分别位于转录起始位点(+1)上游

3、的一94、一64和一31处。在将重组载体pDPRK1一EGFP转染293T、CEL及DF1的实验中观察到3种细胞都有很强的绿色荧光，在显微注射到斑马鱼受精卵的实验中也观察到绿色荧光，该结果表明大鳞副泥鳅B．actin基因近端启动子片段DPRK1具有效的启动功能，为下一步创制转基因泥鳅新品系提供了技术支撑。关键词：大鳞副泥鳅(Paramisgurnusdabryanus)；B—actin；启动子；绿色荧光蛋白；显微注射中图分类号：$917．4文献标识码：A文章编号：1000—6907一(2014)O4018-07The

4、cloningandactivityanalysisofproximalpromoterofI3l-actininParamisgurnusdabryanusLIXiang．he，XUQi，YUQin—ming，TONGYi．yu，XIANYOUCheng-jin，CHENGuo—hong(1．Life—ScienceFaculty，KimHyongJikUniversity，Pyongyang99903，DPRK；2．AnimalScienceandTechnologyCollege，YangzhouUnivers

5、ity，Yangzhou225009，Jiangsu，China；3．Life—ScienceFaculty，KimI1SungUniversityPyongyangAgriculturalCollege，Pyongyang99903，DPRK)Abstract：ByusingPCRamplificationtechniques，p—actingeneproximalpromoterfi'agment，calledDPRK1，wasclonedfromParamisgurnusdabryanusgenome．TheD

6、PRK1wasinse~edintopEGFP—N1，asaresult，afluorescentproteinex—pressionvectorpDPRK1一EGFPwasconstructed．Thosevectorsweretransfectedinto293T，CELandDF1toobservethegreenfluorescenceexpressionsrespectively．Meanwhile．thevectorwasline—typedbyNdeIenzymeandmicroinjectedin—t

7、othefertilizedeggsofDaniorerio．ThecompletesequenceofthepromoterfragmentDPRK1wasl282bpincluding5flankingproximalpromoter(167bp)andanotherfragmentconsistingoffirstexonandfirstintron(1115bp)．The5flankingproximalpromotersequencecontainedCAATbox，GArGmotifandTATAbox，

8、locatedat一94，一64and一31sitesofupstreamsequencerespectively．Secondly，therecombinedvectorpDPRK1一EGFPusingexperimentin293T，CELandDF1cellsshowedstronggreenfluorescenceinthesecell