银耳的菌种分离技术.doc

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1、银耳的菌种分离技术与其它蘑菇不同，银耳各级菌种的生产是双菌培养，即不管制作母种、原种或种植种，在每支试管、每个菌种瓶、每个种植袋（甚至每个接种穴）中都必须让银耳菌丝（双核菌丝，乂称白毛团或芽施状菌种）和伴生菌香灰菌丝在培养基（料）中按比例、协调地生长，才能培养出有实用价值的，可以用于实际种植的有效菌种。为了保证银耳生产上用的菌种之质量，科研人员首先把银耳双核菌丝白毛团、酵母状分生抱子芽抱、香灰菌丝（乂称羽毛状菌丝、耳友菌丝）分别单独分开培养，分开保藏。只有到了制种季节才把两种纯菌种搭配起來，进行混合培养，

2、制成生产上用的各级母种、原种或种植种供各地菌种场或种植者使用。由此可以知道，研究单位保藏的银耳菌种和生产单位使用的菌种是不同的。研究所用的银耳菌种，可以说是一种始祖菌种，是社会上一切生产种的老祖宗，育种学家们称Z原原种，是单一菌种的纯培养物。这些纯菌种供育种、研究专用，一般不对外供应。而社会生产用的银耳母种、原种和种植种则是双菌培养物，即把银耳菌丝或芽他与香灰菌丝（子囊菌）同时接种在培养基中进行混合培养。这样的菌种一般只使用一次。否则在转管时容易人为地把双菌分开，使培养物屮银耳菌丝逐渐减少，绝大部分剩下香

3、灰菌丝而致使银耳种植失败。下而介绍银耳菌种的分离、制备及保藏技术：㈠分离技术获得银耳菌种的方法主要有担抱子弹射分离法、组织分离法和耳1.砲子询射法这是利用新鲜的、成熟的子实体自动弹射出担砲子来获得纯菌种的方法。取朵大、色白、无病虫害的新鲜银耳作为种耳。用无菌水漂洗银耳数次，再用无菌纱布或吸水纸，把银耳表面的水分吸干。因为耳片表而若有薄水层，便会影响银耳担抱子的弹射，并容易污染上杂菌。再把种耳切一小块，以放入三角瓶或放入试管屮不会碰到瓶壁或管壁为度，随后用不锈钢小钩钩住小耳片，迅速悬挂在三角瓶或试管内，同时

4、注意勿使种耳碰到培养基表而，以防污染杂菌，塞上棉塞，然后放在20-25°C条件下，经24小时，从耳片上弹射出来的担砲子，落在光滑的培养基表面上形成一个雾状的抱子印。此时，在无菌箱或无菌室中，将悬于瓶内的耳片取出，再塞上棉塞，移到20-25°C的室中培养，经2-3天，培养基表面就会出现许多乳白色、糊状的小菌落。此系银耳的酵母状分生抱子。当培养基上出现酵母状分生砲子的菌落时，为了防止和减少污染，应尽快地进行提纯，即挑取少许没有杂菌的银耳酵母状分生他子，移入新的试管中进行培养。不管银耳担他子或酵母状分生抱子都不

5、容易萌发成菌丝，所以直接用于生产时有困难，冃前已较少采用。不过，为了获得银耳有性繁殖的后代，必须采用担砲子分离法，并使Z萌发成单核菌丝，然后进行配对实验。2•组织分离法和香菇、平菇不同，银耳组织分离法比较难操作，实用意义也不大。因为耳片一口胶质化Z后，就不容易再长出菌丝，况且段木种植的或野生的银耳，暴露在外界的生长时间很长，耳片上必定会附着各种杂菌，组织分离时既不容易把附着的杂菌洗掉，乂不容易用药品进行表面的灭菌处理，且容易导致银耳和条菌同归于尽。只有位于树皮和木质部之间的肥厚的耳基比较容易进行组织分离，

6、可以获得银耳的纯菌丝。不过用耳基分离来的银耳纯菌丝常是鹅黄色的或橙黄色的，不是纯白的，菌丝生长的速度也比较慢，效果也不太理想。3•耳木分离法利用长了银耳子实体的段木（简称耳木）來进行分离，是冃前获得有实用价值的银耳菌种最主要的方法。耳木分离法的主要技术是排除耳木中杂菌的干扰，防止分离吋污染杂菌，必须把银耳菌丝和香灰菌丝单独分离出来。对初学者来说，耳木分离法是不容易掌握的，必须反复练习，直到掌握分离的要领。耳木分离法的主耍步骤如下：（1）耳木选择在长第一、二批银耳时，取长耳最多，质量最好（尤其是片宽、色白）

7、，杂菌最少的耳木一小段，作为分离材料。分离材料经风干，并用熏蒸剂驱虫（特别是哺）后，移入无菌箱或无菌室屮进行分离。（2）耳木灭菌先把耳木锯成2-4cm厚的木轮，然后去掉树皮、耳基，放入接种箱（室）中，耳木表面用0.1%升汞水或70%酒精揩擦灭菌。技术熟练者也可以不经表面灭菌，就进行分离。（3）耳木取种通过耳基着生处把耳木纵切成两瓣。然后，在耳基着生处的正下方木材内部剃取极小的木屑粉末（不能用小木片，接种块越小，得到银耳纯菌种的机会越大，接种块越大得到香灰菌丝，或香灰菌丝夹杂一点银耳菌丝的机会越多），接种在

8、试管中的培养基表面。接种后，把试管放在20-28°C的室温下培养，数天之后接种块的周围就开始长出菌丝来。（4）分离结呆由于分离的技巧不同，分离的结果也不一样。大致可以得到如下儿种结果：只得到银耳菌丝；只得到香灰菌丝；同时得到银耳菌丝和香灰菌丝，但香灰菌丝占绝对多数；得到银耳酵母状分生砲子和香灰菌丝。如果有杂菌干扰，分离的结果就更复杂了。为了获得有生产价值的银耳菌种，在分离后的第3-7天内耍天天观察，把银耳菌丝和香灰菌丝单独分离