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《银耳菌种规范化生产工艺讲座_三_银耳两个纯菌种的单独分离与混合育成母种的技术》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、ZhejiangShiyongjun2010,18(4):9~12银耳菌种规范化生产工艺讲座(三))))银耳两个纯菌种的单独分离与混合育成母种的技术丁湖广(福建省古田县新元食用菌研究所,古田352200)关键词银耳纯白菌丝;香灰菌丝;分离;育种;交合1银耳纯菌丝分离操作技术单独分离银耳纯菌丝和香灰菌丝,然后进行交合培养的母种,具有适应性好、抗逆力强、朵形美、产量高而稳的优点。可以利用两种菌丝的不同耐旱力,制定银耳纯菌丝分离方法:将新鲜银耳分离材料的基质,通过干燥器逼干,使不耐旱的香灰菌丝先行枯死,进而分离获得耐旱存活的银耳纯菌丝(图1
2、)。111菌材选择在室内外袋栽或瓶栽银耳群体中,挑选长势好、朵形圆正、色白、耳片粗花、肥厚的银耳。认真观察耳基周围是否污染霉菌或放线菌等,袋内颜色是否均匀,若发现污染杂菌或出现杂斑的一律去除。一般以出耳后10~13天健壮期的为好。将挑选好的种耳袋(瓶)经表面消毒后,把子实体齐耳基切除;挖出耳基正下方及周围较硬的基质块,再将基质块切成半个火柴盒大小的方块,作为分离材料。112强行逼干把基质块周围的木屑培养基刮除,将露出白色菌丝体的基质块用卫生纸或纱布包好,置于/玻璃干燥器0中,干燥器底层置于浓硫酸、五氧化二磷或变色硅胶,以达到脱水逼干效
3、果。10~15天,香灰菌丝即枯死。也可将基质块用纱布包好,挂在通风处,经25天左右自然风干后,即可进行分离。113定位分离经过干燥的菌材,从不同部位分离的菌丝,其种质有别:取浅层菌丝分离的菌种,菌丝容易发黄,并在试管内很快展开耳片,菌株生活力较弱,朵型小,易烂耳;若取深层菌丝分离的菌种,其生理成熟度低,也影响成活率。为了得到生活力旺盛,并适合培养料栽培的菌株,必须取中层以下至深层部位的进行分离。该部位分离所得的银耳菌种,成熟度适中,产量稳定。操作时将经脱水后的基质块,置于接种箱内,剥开菌丝,在基质块内层,自上而下或从左至右,用接种针挑
4、取具白色菌丝的木屑小颗粒,移接在琼脂培养基上,一次可接20~30支试管。114控温培养接种后的试管,置于22~24e下,经8~10天的培养,银耳纯白菌丝可以恢复生长。当纯白菌丝出现后,用接种针挑取少许移接到琼脂培养基上培养。若分离培养后还出现香灰菌丝,可继续将分离材料干燥,使香灰菌丝全部死亡后再分离。若培养基偏湿或表面存在水滴,培养后则易出现以酵母状分生孢子方式增殖的现象,或同时出现银耳纯菌丝与酵母状分生孢子。银11袋栽银耳割掉子实体21取出分离材料31去掉疏松木屑的基质块41放干燥器内逼干51分离部位取中61接入试管内71棉花塞口耳
5、纯菌丝生长十分缓慢,在适温下培养20图1银耳纯菌丝的分离过程天左右,其菌落只有豆粒大小。#10#2010年第18卷第4期115提纯扩大上述第一次分离出来的银耳纯菌丝,待菌落长到黄豆大小时,应进行纯化扩大培养。方法是用接种针在银耳菌落边缘,挑取小米粒大小带培养基的银耳纯菌丝,移接到试管培养基斜面上,每管斜面接2~3个点,然后置于23~25e下培养10天左右。当接种点周围出现白色短密的菌丝,形似绣球状的白毛团,而培养基不变色,此即为银耳纯菌种。2香灰菌丝分离操作技术获得银耳纯菌丝后,还得分离作为/开路先锋0的伴生菌香灰菌丝,其来源与分离技
6、术如下。211从种木中分离在野生银耳生长的木材中或栽培银耳的段木中,都存在抗逆性及分解基质能力较强的香灰菌丝,经过驯化培养,其性状都十分优良。袋栽银耳的培养基内的香灰菌丝,常因反复移植使用,生命力不如前者旺盛。分离香灰菌丝时,应选取子实体洁白、朵大、开瓣清楚、无病虫害、无烂头和无杂菌的种木,在靠近子实体基部,截取一段作为分离材料。在接种箱内割掉子实体,并熏蒸灭菌,然后从木材断面褐色花纹较密处,切下一小块木材,用011%升汞溶液进行表面消毒后,置于培养皿内。再用经火焰灭菌后的解剖刀,削去木材外层,用刀尖将木材切成粗细如同火柴梗,长015
7、厘米的小段。取一小段接入琼脂培养基的斜面上,移接后的试管置于24~28e下,培养5~6天菌丝萌发。随着培养时间的延长,菌丝产生色素溶入培养基中,使之变成黑色。当菌丝长至斜面1P2时,挑取菌落前端的菌丝,转管纯化培养4~5天,便可得到纯香灰菌丝体。212从木屑培养基中分离在接种箱无菌条件下,打破(剪开)银耳菌种瓶(袋)底部,从大理石状黑色花纹上选取香灰菌丝生长的前端,挑取米粒大小,移接到琼脂培养基斜面上,培养2~3天后斜面上的接种点出现灰白色菌丝,继续培养1~2天,产生绒毛状气生菌丝,并能分泌黑色素使培养基逐渐变为棕黑色。当菌丝长至斜面
8、1P2时,挑取生长旺盛、爬壁力强的香灰菌丝的前端,转管纯化。香灰菌丝生长较快,在24~28e下培养4~5天,便可获得纯香灰菌丝。3两种菌丝的特征与交合育成母种的方法银耳纯菌丝和香灰菌丝单独分离时,由于分离技术不同,分离效
