乙型肝炎患者病毒复制的检测与分析-论文.pdf

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1、2014年第O1月第O1期霪一乙型肝炎患者病毒复制的检测与分析李敏(四川省成都市龙泉驿区疾病预防控制中心四川成都610100)【摘要】目的分析乙肝病毒复制检测方法，为乙肝病程评价及抗病毒疗效的观察提供依据。方法：用免疫发光法检测乙肝三系；用荧光定量PCR检测HBVDNA；ELISA法检测LHBs和PreS1；用基因芯片进行基因分型，S基因序列同源性测序复核优势基因型。结果：pre—s1检出率为49．19％；LH．Bs检出率为87．1O％，经统计LHBs、HBVDNA与pre—S1有统计学意义差异(P<0．05)。e抗原阴

2、性病人存在HBV复制。病人中检出B、C、BC和BCD混合型4个基因型；重型肝炎与肝癌组中C型检出率高于其他组(P<0，05)。结论：HBVDNA、乙肝三系、PreS1、基因芯片和LHBs方法能提供乙肝病程、疗效等依据，但以LHBs的设备要求低、操作简单，适合不能开展HBVDNA检测的基层医院；检测发现B、C型宁波地区是优势基因型，重型肝炎和肝癌患者检出的基因型多为C型，提示C型患者预后较差。【关健词】乙型肝炎病毒；病毒复制方法；基因芯片分型；优势型分析；分析【中图分类号】R373．2【文献标识码】B【文章编号】1672—

3、3783(2014)01—0291一o1我国是乙型肝炎(以下简称乙肝)的高发地区，在众多的无症状病毒min。④膜片放入显色液中10s，迅速取出，置湿盒中于370C10～20min。携带者中可引起急、慢性肝炎，并导致肝硬化和肝癌，由于治愈困难，且愈⑤取出芯片，除去盖玻片，双蒸馏水轻轻荡洗几秒，并将其自然凉干。)一后较差，已成为危害广大人民群众健康的社会性问题⋯。对乙肝病程评结果判读(根据膜显色的点阵信息按照软件分析报告，或用肉眼观结果，价及抗病毒疗效的观察，长期以来，主要以肝功能改善、HBV—DNA转阴基因分型结果判断见图

4、1。)及HBeAg的血清转换为指标。随着HBV基因组中开放读框功能的确定，图1基因芯片HBV基因分型胶片示意图以及前S区在乙肝病毒发病机制、感染及复制等方面的研深入究，使人们4艇片墨盎翌逐渐认识到乙肝前s区在判断病毒复制及抗病毒治疗疗效的重要性I2J，了解乙肝患者体内的病毒复制情况，HBeAg阴性慢性乙肝患者，其体内是：：：：：：⋯：：否有病毒复制，我们对常用的检测HBV—DNA、HBV—LP、前Pre—s1、基8¨D’因分型及HBeAg等血清学指标方法，探讨乙肝患者中病毒复制及临床意义。现将结果报告如下．：：：：1材料

5、与方法●⋯。：：‘‘H⋯⋯1．1标本来源(1)病人标本采集124例医院门诊与住院慢性乙肝病人血液标本。病人均经临床和实验室检查确诊，诊断符合病毒性肝炎2结果掣一碰迥罐强睦一懋喇穗防治方案标准_3J，血清学指标为HBsAg阳性、HBeAg阳性、抗HBc阳性；2．1HBV基因型检出情况从100例患者血清样品中检出B型、c(2)对照标本30份阴性对照血清，采自本院非乙肝患者，乙肝三系标志均型、BC混合型、BCD混合型4个HBV基因型，有4例患者血清样品未能分阴性、HBV—DNA用PCR检测低于检测值，采血后分离血清，置一20o

6、C冰型，分型率达96．O％，其中B型36例，占36．O％，C型47例，占47．O％，BC箱内保存备用。(3)乙肝临床分组标本选取本院2010年2月以来住院患混合型11例，占11．O％，BCD混合型2例，占2．O％，HBV基因分型各型者中血清HBV—DNA阳性患者100例。诊断标准按病毒性肝炎防治方阳性检测结果见图2。案L2J，其中，急性乙型肝炎2O例，慢性乙型肝炎轻度2O例，慢性乙型肝炎图2100例患者HBV基因型型别中重度20例，重型乙型肝炎2O例，乙肝合并原发性肝癌20例。男性71#p#例，女性29例，平均年龄43±

7、17岁。排除重迭或混合其它嗜肝病毒感染⋯*☆《⋯≈*⋯者。病人采血分离血清后于一8Occ冰箱内保存备用。⋯≈1．2主要仪器：IBA荧光定量扩增仪，由美国ABI公司产品；AllegaBCSL)25R型高速冷冻离心机，由美国贝克曼公司产品；AU2700全自动生化分析2．2基因型复核B、C基因型复核为确定基因芯片法分型的可靠性，仪，由日本奥林派斯公司产品；12000免疫发光仪，由美国亚培公司产品；7份送上海基康生物技术有限公司进行HBVS区基因测序分型的复核结Eppendof移液器，使用前经过纠正；PCR实验室通过卫生部验收，

8、取得合果与基因芯片法完全一致，仍为4例C基因型的比对结果达99．O％，3例格资质，操作人员经培训持有上岗证书。B基因型的比对结果达99．3％，见图3。1．3实验方法图3HBVS基因序列同源性分析结果1．3．1HBVDNA定量测定采用荧光定量PCR(FQ—PCR)方法，试：：：剂为广州达安技术诊断公司产品，灵敏度为5x