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1、乙型肝炎患者病毒复制检测和研究【摘要】目的分析乙肝病毒复制检测方法，为乙肝病程评价及抗病毒疗效的观察提供依据。方法：用免疫发光法检测乙肝三系；用荧光定量PCR检测HBVDNA；ELISA法检测LHBs和PreS1；用基因芯片进行基因分型，S基因序列同源性测序复核优势基因型。结果：pre-Sl检出率为49.19%；LHBs检出率为87.10%,经统计LHBs、HBVDNA与pre-S1有统计学意义差异（P图1基因芯片HBV基因分型胶片示意图2结果2.1HBV基因型检出情况从100例患者血清样品中检
2、出B型、C型、BC混合型、BCD混合型4个HEV基因型，有4例患者血清样品未能分型，分型率达96.0%,其中B型36例,占36.0%,C型47例，占47.0%,BC混合型11例，占11.0%,BCD混合型2例，占2.0%,HBV基因分型各型阳性检测结果见图2。图2100例患者HBV基因型型别BCBCBCD2.2基因型复核B、C基因型复核为确定基因芯片法分型的可靠性，7份送上海基康生物技术有限公司进行HBVS区基因测序分型的复核结果与基因芯片法完全一致，仍为4例C基因型的比对结果达99.0%,3例
3、B基因型的比对结果达99.3%,见图3。图3HBVS基因序列同源性分析结果C型B型2.3病人临床类别与HBV基因型按肝炎临床分类标准100例HBV患者可为急性肝炎、慢性肝炎轻度、慢性肝炎中重度、重型肝炎、原发性肝癌等5个组，其基因型构成见表lo基因型以B型和C型为主，重型肝炎和原发性肝癌组C型的检出率高于其它组。2.4HBVDNA、肝功能水平与B、C基因型，83例B、C基因型与HBVDNA、肝功能结果见表2。2组基因型与乙肝检测项目经统计学处理无显著性差异(x2=0.236,P>0.05)2.5
4、乙肝大蛋白(LHBs)检测2.5.1病人中LHBs检出情况对124例慢性乙型病毒性肝炎病人标本进行LHBs,中检出LHBs阳性108份，阳性率为87.10%,其中HBV标志物模式为HBsAg.HBeAg、抗HBc的96标本中检出LHBs阳性的90份，阳性率为93・75%,HBsAg、抗HBe、抗HBc阳性的28份标本中检出LHBs阳性18份，阳性率为64.29%O30份非乙肝病人的血液标本LHBs检测均为阴性结果。2.5.2IIBV标志物、HBVDNA与LHBs检出比较96份HBsAg、HBeA
5、g.抗-HBc阳性标本中，HBVDNA与LHBs检出率分别为97.91%和93.75%；28份HBsAg、抗-HBe、抗_HBc阳性标本中，HBVDNA与LHBs检出率分别为57.14%和64.29%,不同HBVM模式的HBVDNA与LHBs的检出率见表3,经统计两者无统计学意义差异（x2=1.82,P>0.05）o注：30份非乙肝病人的血液标本LHBs和HBVDNA测定均为阴性，表3HBVDNA拷贝数与LHBs结果110份HBVDNA阳性标本中，其HBVDNA拷贝数存在差别，说明HBV复制存在
6、高低，不同HBVDNA拷贝数与LHBs的检出率比较见表4,两方法的符合率达96.36%o2.6.1检出情况从124例慢性乙型病毒性肝炎病人血清标本中检出LHBs与pre-S1阳性的分别为108份和61份，阳性率分别为87.10%和49.19%o30份非乙肝病人的血液标本LHBs和pre-S1检测均为阴性结果。2.6.2HBV标志物、HBVDNA、LHBs与pre-Sl比较96份HBV标志物模式为HBsAg、HBeAg、抗HBc的标本中检出LHBs阳性的90份，pre-Sl阳性55份，阳性率分别为
7、93。75%和57.29%,28份HBV标志物模式为HBsAg.抗HBe、抗HBc阳性的标本中检出LHBs阳性18份，pre-Sl阳性6份，阳性率分别为64.29%和21.43%,以实时荧光定量PCR法检测HBVDNA为对照，结果见表5,经统计学分析LHBs与HBVDNA检测结果无显著性差异（x2二0.644,P>0.05）,pre-Sl检出结果与LHBs与HBVDNA有显著性差异（x2=41.033和38.667,PO.05）o说明LHBs法具有较好的敏感性、特异性和较高的检出率。当血中HBV
8、高浓度时，与定量PCR的一致度达100%,HBVDNA的拷贝数与LHBs的阳性率呈正比，两者具有良好的相关性，提示我们LHBs在评估HBV的复制意义上与检测HBV-DNA相同。由于LHBs检测是一种酶联免疫方法，仪器设备要求低、操作简单，各级医疗机构都能开展,特别是对于不能开展HBVDNA检测的基层医院更有应用价值，其临床意义更大。检测显示乙型肝炎两对半e抗原阳性组与LHBs和HBVDNA测定结果基本一致，无统计学意义差异（P>0.05）,反映出病人体内HBV复制的活动能力较强，处于治疗初期或治
