吸附交联法和包埋法固定化混合酶研究-论文.pdf

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1、第22卷第3期淮海工学院学报(自然科学版)Vo1．22No．32Ol3年9月1ournalofHuaihaiInstituteofTechnology(NaturalScienceEdition)．Sep．2013I)()I：10．3969／j．issn．1672—6685．2013．03．022吸附交联法和包埋法固定化混合酶研究孙玉英，张继泉(1．淮海工学院海洋学院，江苏连云港222005；2．中国科学院海洋研究所，山东青岛266071)摘要：对从自然界分离得到的Microbacteriurnsp．OU

2、01进行发酵，制得粗酶液(壳聚糖酶和氨基葡萄糖苷酶混合液)，采用吸附交联法及包埋法对其进行固定，研究其固定化的最优条件和固定化酶的酶学性质。结果表明，游离混合酶液的最佳PH为5．6，最适反应温度为5O。C。吸附交联法固定化酶的最佳条件为：戊二醛体积分数5．0，加酶量15mL(49．51U／mL)，固定化时间6h。该条件下制得的固定化酶的最适pH为4．5，最适反应温度为6O℃。包埋法固定化酶的最佳条件为：海藻酸钠质量浓度10g／L，CaC1。质量浓度15g／L，加酶量为1mL(50．35U／mL)／5mL质

3、量浓度10g／L海藻酸钠，固定化时间20min。该条件下制得的固定化酶的最适PH为5．0，最适反应温度为50℃。固定化酶酶解壳聚糖所得产物中含I)I氨基葡萄糖，说明粗酶液中的壳聚糖酶和外切一D一氨基葡萄糖苷酶被同时固定。通过对游离酶和固定化酶稳定性的研究，表明吸附交联固定化酶更适于工业化应用生产【)I氨基葡萄糖。关键词：壳聚糖酶；【)-氨基葡萄糖苷酶；吸附交联法；包埋法；固定化酶中图分类号：Q53文献标识码：A文章编号：1672—6685(2013)03—0082—07ComparativeStudyof

4、CrudeEnzymeImmobilizationbyCross—linkingandEntrapmentMethodsSUNYu—ying”．ZHANGJi—quan(1．SchoolofMarineScience．HuaihaiInstituteofTechnology，Lianyungang222005，China；2．InstituteofOceanology，ChineseAcademyofSciences，Qingdao266071．China)Abstract：Thecrudeenzyme(

5、includingchitosanaseandD-glucosaminidase)wasgotbythefer—mentationofMicrobacteriumsp．ou01thatwasseparated．Adsorptioncross—linkingmethodandentrapmentmethodbysodiumalginatewereadoptedtoimmobilizecrudeenzyme．Theeffectofreactionconditionsontherelativeactivityo

6、fimmobilizedcrudeenzymebytwokindsofimmobi—lizationmethodswastested．Theresultsshowthatthebestefficiencyofimmobilizationbyad—sorptioncross—linkingmethodwasobtainedwhenglutaraldehydeconcentrationwas5．0，crudeenzymedosagewas15mL(49．51U／mI)andimmobilizedtimewas

7、6h．Thebestefficiencyofimmobilizationbyentrapmentmethodwasobtainedwhensodiumalginateconcentrationwas10g／L，crudeenzymedosagewas1mL(50．35U／mL)／5mL10g／Lsodiumalginate，CaC12coneen—trationwas15g／Landimmobilizedtimewas20min．TheoptimalpHandtemperatureofthecrudeen

8、zymewere5．6and50℃．ButtheoptimalpHandtemperatureoftheimmobilizedenzyme收稿日期；2013-06—25；修订日期：2013-07—03基金项目：中国博士后科学基金资助项目(2011M501169)；江苏省海洋生物技术重点建设实验室开放课题(2009HS01)作者简介：孙玉英(1974一)，女，山东诸城人，淮海工学院海洋学院副教授，博士，主要从事微生物酶技术方面的