人同源盒基因NKX3.1内含子及5＇上游10kb调控区功能的初步分析-论文.pdf

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1、第5O卷第12期山东大学学报(医学版)2012年12月VO1．50NO．12JOURNALOFSHANDONGUNIVERSITY(HEALTHSCIENCES)Dec．2012文章编号：1671—7554(2012)12—0013—06DOI：10．6040／j．issn．1671-7554．2012．12．003·基础医学·人同源盒基因NKX3．1内含子及5上游1Okb调控区功能的初步分析于春晓’，金童4，姜安丽，赵家军。(1．山东大学附属省立医院内分泌科，济南250021；2．山东省内分泌代谢病临床医学中心，济南250021；3．山东省临床医学研究院内分泌代谢研究所，济

2、南250021；4．山东大学齐鲁医院耳鼻咽喉科，济南250021；5．山东大学医学院，济南250021)摘要：目的检测人同源盒NKX3．1基因内含子及5上游10kb调控区对启动予活性的影响，分析其雄激素反应性和组织特异性，为进一步研究该基因表达调控机制奠定基础。方法利用基因重组技术分别构建5上游l0kb调控区／内含子一NKX3．1基本启动子一荧光素酶报告基因质粒。转染雄激素依赖性前列腺癌细胞株LNCaP后，检测荧光素酶表达活性，观察内含子及5上游调控区对NKX3．1启动子活性的影响；加入雄激素类似物R1881刺激，进一步检测其雄激素反应性；通过转染不同细胞分析其组织特异性。结

3、果荧光素酶报告基因分析表明，NKX3．1基因5上游一7681一一6483bp可以增强其启动子活性2．6倍，但该增强作用并不具有组织特异性。内含子及5上游10kb其他区域对NKX3．1启动子活性未见明显的增强作用。R1881刺激并不能使内含子及5上游l0kb调控区活性明显增强。结论NKX3．1基因内含子及5上游10kb调控区不具备雄激素反应性，5上游一7681～一6483bp可以增强NKX3．1启动子活性，但其组织特异性增强元件并不存在于该片段。关键词：前列腺肿瘤；人同源盒基因NKX3．1；基因表达调控；顺式作用元件；雄激素反应性；组织特异性中图分类号：R34文献标志码：AFu

4、nctionalanalysisintheintronand10kbupstreamregionsofhumanhomeoboxgeneNKX3．1YUChun．xiaol1．JINTong，JIANGAn．1i’，ZHAOJia-junI1(1．DepartmentofEndocrinology，ProvincialHospitalAfiliatedtoShandongUniversity，Jinan250021，China；2．ShandongClinicalMedicalCenterofEndocrinologyandMetabolism，Jinan250021。Chi

5、na：3．InstituteofEndocrinologyandMetabolism，ShandongAcademyofClinicalMedicine。Jinan250021．China；4．DepartmentofOtolaryngology，QiluHospitalofShandongUniversity，Jinan250021，China；5．SchoolofMedicine，ShandongUniversity，Jinan250021，China)Abstract：0bjectiveTofurtherillustrateregulationmechanismsont

6、heexpressionofhomeoboxgeneN．1，theintronandthe10kbupstreamregionofNKX3．1genewereclonedandtheireffectsonNKX3．1promoteractivityweredeterminedtofindtheandrogenresponseelementandthetissue—specificenhancer．MethodsAccordingtothese—quenceofNKX3．1geneinGenbank．aNKX3．1promoter—luciferasereporterplasm

7、idwasconstructedbyPCRtechnolo—gY．Further。allintron—promoter—luciferasereporterplasmidand10fragments—promoter—luciferasereporterplasmidswereconstructedseparately．AfterrecombinatedplasmidsweretransfectedintoprostatecancercelllineLNCaP．theeffectsoftheintron