前列腺特异抗原3慢病毒表达载体的构建与包装-论文.pdf

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1、中国癌症杂志2013年第23卷第1l期CHINA0NCOLOGY2013Vo1．23N0．1l857前列腺特异抗原3慢病毒表达载体的构建与包装刘晓军王娜姚旭东曹达龙1．复旦大学附属肿瘤医院泌尿外科，复旦大学上海医学院肿瘤学系，上海200032；2．复旦大学附属肿瘤医院肿瘤研究所，复旦大学上海医学院肿瘤学系，上海200032[摘要】背景与目的：前列腺癌抗原3(prostatecancerantigen3，PCA3)作为一种长链非编码RNA(1ncRNA)已被证实在前列腺癌中高度特异性表达，暗示其可能在

2、前列腺癌中发挥重要作用，为深入研究，我们将完整的PCA3基因转入真核表达载体，并构建慢病毒包装系统。方法：从前列腺癌细胞株LNCaP细胞中提取总RNA，运用重叠延伸方法扩增~UPCA3基因，测序正确后定向接入真核表达载体pCDH—CMV—MCS—EF1一copGFP，酶切鉴定并测序正确后进行慢病毒包装和滴度测定。结果：经PER鉴定及测序，PCA3表达质粒序列与GeneBank序列进行Blast比对分析，同源性为99．8％，PCA3慢病毒滴度测定为2×108。结论：PCA3成功插入真核表达载体并完成了

3、慢病毒包装，为深入研究PCA3基因在前列腺细胞中的作用奠定了基础，进而为探索前列腺癌的治疗提供了新的途径。[关键词]前列腺癌；前列腺癌抗原3；真核表达载体；慢病毒DOI：10．39690．issn．1007-3969．2013．11．001中图分类号：R737．25文献标志码：A文章编号：1007．3639(2013)11-0857．06Constructionofeukaryoticexpressionvectorandpackageoflentivirusvectorencodingprosta

4、tecancerantigen3LIUXiao-jun，WANGNa2，YAOxu-dong，CAODa—long(1．DepartmentofUrology,FudanUniversityShanghaiCancerCenter,DepartmentofOncology,ShanghaiMedicalCollegeFudanUniversity,Shanghai200032，China；2．DepartmentofCancerInstitute，FudanUniversityShanghaiCan

5、cerCenter,DepartmentofOncology,ShanghaiMedicalCollegeFudanUniversity,Shanghai200032，China)Correspondenceto：YAOXu-dongE-mail：yaoxudong67@sina．com[Abstract]Backgroundandpurpose：Theincreasedofspecificexpressionofprostatecancerantigen3(PCA3)，asoneoflongnon

6、—codingRNA，hasbeenobservedinprostatecancer,indicatingthatPCA3maycontributetothedevelopmentofprostatecancer．Tofurtherstudyitsrolesinprostatecancer,weconstructalentivirusexpressionvectorcarryingthewholePCA3．Methods：PCA3wasamplifiedfromprostatecancercelll

7、ineLNCaPbyreversetranscriptasepolymerasechainreaction(RT-PCR)．Afterthesequencewasprovedtobecorect，werecombinedthepCDH—CMV-MCS-EF1·copGFP-PCA3．AftertransformationintoE．colicells，thecandidatecloneswereidentifiedbyPCRamplifying，restrictingenzymedigestiona

8、nalysisandDNAsequencing，andtheviraltiterwasdetermined．Results：ThroughtheBlastanalysissoftware，wecomparedtheresultsofPCA3sequenceamplifiedbyPCRwithGeneBanksequence．findingthatthehomologyis99．8％．Thelentivirusvectorwasconstructedsuccessful