光谱法研究芦丁及槲皮素与牛血清白蛋白的作用-论文.pdf

《光谱法研究芦丁及槲皮素与牛血清白蛋白的作用-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、2014年8月第42卷第4期中医药学报Vo1．42，No．4，Aug．2014ActaChineseMedicineandPharmacology·23·光谱法研究芦丁及槲皮素与牛血清白蛋白的作用董黎明，邹淑君，张蕾，徐唠，闫静(黑龙江中医药大学药学院，黑龙江哈尔滨150040)摘要：目的：比较芦丁和槲皮素与牛血清白蛋白(BSA)作用的差异，探讨黄酮类化合物C环3位羟基糖苷化与否对结合白蛋白的影响。方法：荧光光谱、紫外一可见吸收光谱、同步荧光光谱和圆二色谱法测定芦丁和槲皮素与BSA的作用。结果：在实验条件下，槲皮素对BSA的荧光猝灭作用明显强

2、于芦丁。二者与BSA的作用以静态结合为主。低浓度的槲皮素影响BSA的酪氨酸的微环境，基本不影响BSA色氨酸的微环境：低浓度的芦丁对BSA的酪氨酸及色氨酸微环境基本不影响。二者在高浓度下都能够轻微改变BSA的二级构象。结论：黄酮C环3位羟基糖苷化会降低其对BSA的亲和力，影响与BSA之间的结合位点。关键词：芦丁；槲皮素；牛血清白蛋白；光谱法中图分类号：R284．1文献标识码：A文章编号’：1002—2392(2014)04—0023—04黄酮类化合物有广泛的药理活性，被吸收到血液里往往与血清蛋白发生相互结合而达到运送和分布的OH目的¨-2]。黄

3、酮与蛋白结合作用的强弱、结合位置等H因素都可能影响它们的吸收、运输、释放及药效等。因此探索黄酮类药物与蛋白质相互识别部位的结构特征，有助于深入认识黄酮与蛋白质相互作用的机理。芦丁(Rutin)，具有降低毛细血管通透性的功能，R=-glc-rha芦丁能维持血管正常的渗透压，对多种炎症也具有良好的IR=H槲皮素疗效。芦丁水解可得槲皮素(Quercetin)，槲皮素是自图1芦]和槲皮素的结构式然界中最强的抗氧化剂之一，具有抗肿瘤、降低血压，芦丁及槲皮素(均为98％，中国药品生物制品检保护心肌缺血再灌注损伤、抗病毒、镇痛及止泻等作定所)，二者分别用少

4、量甲醇溶解后，再用二次蒸馏水用j。二者结构式见图1。本文采用多种光谱法测试定容，配成1×10I4mol／L的溶液；三羟甲基氨基甲烷二者与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用，研究二者与(Tris，99．8％，上海博宏生物科技有限公司)；牛血清BSA之间的作用强弱、作用机制及对BSA构象的影白蛋白(BSA，99．8％，美国Sigma公司)，用pH7．4的响，分析黄酮C环3位羟基是否糖苷化对结合BSA作Tris—HC1缓冲液(含0．1mol／LNaC1)配成1×10用的影响。mol／L，4oC保存。1实验部分1．2实验方法1．1试剂与仪器1．2．1荧

5、光猝灭光谱和同步荧光光谱RF一5301PC型荧光光度计(Et本岛津公司)；用Tris—HCI(pH=7．40)缓冲液稀释获得不同浓UV一1601PC型紫外可见分光光度计(日本岛津公度的芦丁及槲皮素溶液。分别置于290K、300K、310K司)；J一815型圆二色光谱仪(Et本分光公司)；PB一水中温浴15min后测定，固定激发波长280nm，扫描20型pH计(德国赛多利斯仪器有限公司)。290～450nm范围内的荧光光谱。并分别固定△=15nm及△=60nm，记录二者与BSA混合溶液的同步收稿日期：2o13一l】一O3修回日期：2o13—12

6、—15荧光光谱(激发狭缝均为5nm，发射狭缝均为3nm)。基金项目：黑龙江省教育厅资助项目(No．12531648)1．2．2紫外一可见吸收光谱作者简介：董黎明(1989一)女，硕士研究生，主要从事药物分析研究。室温下，以pH=7．4的Tris—HC1缓冲液为参比，通讯作者：闫静(1962一)，女，博士，教授，主要从事药物合成与有机在200～450nm范围内，分别扫描BSA溶液(1．0×质谱研究。中医药学报2014年8月第42卷第4期ActaChineseMedicineandPharmacologyVo1．42，No．4，Aug．20141

7、0～mol／L)、芦丁／槲皮素溶液(1．0×10mol／L)和BSA因含有色氨酸、酪氨酸及苯丙氨酸等氨基酸芦丁／槲皮与BSA(均为1．0×10mol／L)混合溶液的残基而能发射较强的内源荧光。300K时，不同浓度紫外光谱。的芦丁／槲皮溶液存在下BSA的发射光谱见图2。由1．2．3圆二色谱(CD)图2可见，二者都能明显猝灭BSA的内源荧光，且槲室温下，在一系列10mL比色管中，分别加入皮素存在下，引起BSA的最大荧光发射波长蓝移1～1．0mLBSA(1．0×10mol／L)溶液，然后依次加入不2nm，蓝移表明氨基酸残基周围所处微环境疏水性增同体

8、积的芦丁／槲皮溶液，Tris—HC1缓冲液定容，放置加，极性减弱；芦丁存在下，BSA的最大荧光发射波30min后测CD谱。样品池为0．4mm的石英池。长基本不移动。