副猪嗜血杆菌血清型4、5的生物学特性及致病力-论文.pdf

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1、第31卷第5期龙岩学院学报V0】．31No．52013年10月JOURNALOFLONGYANUNIVERSITY0ctober2013副猪嗜血杆菌血清型4、5的生物学特性及致病力林标声，刘建奎，一，李晓华，一，杨小燕，(1．龙岩学院福建龙岩364012；2．预防兽医学与生物技术福建省高等学校重点实验室(龙岩学院)福建龙岩364012；3．福建省人畜寄生与病毒性疫病防控工程技术中心福建龙岩364012)摘要：研究和比较了副猪嗜血杆菌血清型4、5的生物学特性及致病力．结果表明添加一定量胎牛血清和NAD的TSA培养基是Hps血清型4、5的良好培养基，两种茵的平板菌落形态和显微形态一致，且

2、生理生化特征也一致；Hps血清型4、5OmpP5的基因序列具有高度同源性，其氨基酸同源性达92．6％以上，核苷酸同源性达93．0％以上，但致病力不同，Hps血清型5的致病力要强于Hps血清型4关键词：副猪嗜血杆菌；血清型：生物学特性；致病力中图分类号：$858．28文献标识码：A文章编号：1673—4629(2013)05—0055—04副猪嗜血杆菌病，又称猪革拉泽氏病血清型毒力差异较大，存在着交叉感染，造成(Glasser’Sdisease)，是由副猪嗜血杆菌药物防治效果不一，针对性较差．给Hps的防(Haemophilusparasui，Hps)引起的一种以多发治带来了极大的困难

3、。13]据报道，不同国家或地性猪的关节炎、脑膜炎等为特征的疾病。随着区Hps的流行血清型不同，如日本、德国、美养猪业的不断壮大发展，该病已成为了危害仔国、加拿大和澳大利亚以血清型4、5和13最猪和生长猪最严重的细菌性疾病，发病率达到为常见；我国也多次报道了不同省市的分离15～30％，死亡率50％以上。⋯据龙岩学院动物株，如蔡旭旺等报道了全国l0多个省市的Hps医学研究所不完全统计，该研究所2012年接诊分离株，认为我国当前流行的血清型主要有4．猪病277例。其中猪瘟134例，占48．4％：副猪5，12，13型，但不同地方的优势血清型有所不嗜血杆菌病43例，占15．5％，临床病例排第二

4、，同，所以对副猪嗜血杆菌病的防控增加难度【4]。细菌性疾病排第一，且呈现逐年上升的趋势。据龙岩学院动物医学研究所对送检的多个猪Hps存在着不同的血清型，根据同型细菌场Hps样本进行检验，在闽西地区最为流行的外膜蛋白抗原的不同，至少可分为l5种血清Hps为血清型4和血清型5。15]因此本论文通过型，另有20％以上的分离株不能分型。【2I不同分离当地流行的Hps血清型4、5，充分了解其收稿日期：2013—07—03作者简介：林标声，男，福建连城人，龙岩学院生命科学学院讲师，主要研究方向：微生物学。通信作者：杨小燕，女，福建龙岩人，龙岩学院生命科学学院教授，主要研究方向：动物医学。基金项目

5、：福建省科技计划重大项目(2011N5012)，福建省教育厅科技研究计划项目(JA12319、JB12211)；龙岩市科技计划项目(2012LY78)，龙岩学院校立服务海西项目(LYXY2011091)。55副猪嗜血杆菌血清型4、5的生物学特性及致病力；薹谜拽生物学特性、耐药特性及致病力，为闽西地区尿素酶、吲哚、硫化氢、氧化酶、接触酶实验，比副猪嗜血杆菌病的药物防治、本土疫苗的研发较两种菌株的生理生化特性差异。与疫病防控提供相关的理论基础与依据。1．2．3Hps血清型4、5OmpP5基因的序列鉴定1材料与方法提取Hps血清型4、5菌株基因组DNA进1．1实验材料与设备行PCR扩增、电

6、泳。将其扩增的PCR目的片段菌种：龙岩学院动物医学研究所分离得到进行测序，在GenBank中进行比对，判断其与的Hps血清型4、5，脱脂牛奶一20~C冻干保存、国内外菌株OmpP5基因序列的同源性。PCR引待用。物设计、模板处理、扩增条件、反应条件、电泳试剂：TSA购自北京奥博星生物技术有限条件等参照刘建奎l7l、车勇良㈣等人的方法。责任公司，使用时需无菌加入胎牛血清(50mL／1．2．4Hps血清型4、5菌株耐药性研究L．浙江天杭生物科技有限公司)和烟酰胺腺嘌配制最适Hps血清型4、5生长培养基平呤二核苷酸(NAD)(0．01％，成都贝斯特试剂有板，分别取其纯培养液0．2mL涂布于

7、平板，把限公司)；巧克力琼脂平板、鲜血琼脂平板、LB含不同药物的药敏纸片贴在该平板上，置于肉汤培养基平板(加50mL／L胎牛血清、0．01％37培养箱中培养48h，通过测定抑菌圈大NAD和2％琼脂_6J)。小。比较Hps血清型4、5对不同药物的敏感程主要仪器：双层全温度振荡器(ZHWY一度。判断依据：根据杭州天和微生物试剂有限2102，上海智诚分析仪器制造有限公司)；台式公司提供的纸片法药敏试验抑菌环直径判断低速离心机(TDL一5，金坛梅香仪器有限公司)；