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1、副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis,HPS)是猪上呼吸道的一种常在菌,副猪嗜血杆菌病又称格拉泽氏病。可引起纤维素性浆膜炎和关节炎,影响2周龄~4月龄猪,主要在断奶前后和仔猪阶段发病,常见于5~8周龄猪,发病率一般为10%~15%,严重时死亡率可达50%以上[1],其他年龄段的青年猪、母猪及种公猪亦可感染,有的以隐性感染或慢性跛行为重,也可通过直接接触呼吸道和消化道等途径传播。最近研究人员发现HPS不仅可以感染家猪,也可以感染野猪。A.Olvera等[2]从42头捕获的欧洲野猪中分离到2株HPS,属于血清
2、2型,为首次从野猪中分离到HPS。随着规模化、集约化猪场的发展,副猪嗜血杆菌引起的以猪多发性浆膜炎、关节炎、呼吸困难、高热及高死亡率为特征的传染性疾病给养猪业带来巨大的经济损失,副猪嗜血杆菌引起的疾病已逐渐成为世界范围的重要疾病。近年来,由于受蓝耳病等猪流行病的影响,猪免疫功能下降,猪副嗜血杆菌病时有发生,给养猪户造成了严重的经济损失[3]。因为引起该病的副猪嗜血杆菌血清型较多(已知有15个血清型),发病症状和剖检变化表现不一,不同的血清型对某种抗生素或磺胺类药物的敏感程度不一样,大量菌株对四环素、红霉素、氨基糖苷类和林
3、可霉素有明显的抵抗力[4],为了获得较好的疗效,在积极做好预防工作的同时,建立快速有效的检测方法无疑是预防、控制副猪嗜血杆菌病的前提条件,国内外在近几年相继建立的诊断技术有ELISA、PCR和基因芯片技术,满足了其流行病学监测及现地诊断与防制的迫切需要。1病原学副猪嗜血杆菌是一种革兰氏阴性短小杆菌,属于巴斯德菌科嗜血杆菌属,无芽孢,不运动,兼性厌氧[5]。荚膜易在培养过程中丢失。副猪嗜血杆菌的生长依赖“烟酰胺腺嘌呤二核苷酸”(NAD或V因子),在常规培养基中不能生长,尤其是应用抗生素治疗过病猪的病料,因因而给本病的诊断带
4、来困难,而副猪嗜血杆菌的真实发病率可能为实际确诊的10倍多[6]。在血液培养基和巧克力培养基上生长,菌落小而透明,在血液培养基上无溶血现象;在葡萄球菌菌台周围生长良好,形成卫星现象。目前副猪嗜血杆菌至少可分为15种血清型,其中血清型1、5、10、12、13和14为高毒力致病株;血清型2、4、15为中等毒力株;血清型3、6、7、8、9、11毒力较低,被证明不能引起临床感染[4,5]其中又以5、4、13最为常见(占临床分离的70%以上)[7]。不同血清型毒力存在差异,研究人员对此做了动物感染试验。将15种血清型的Hps菌株通
5、过腹腔内接种方式感染SPF(specificpathogenfree)猪,结果发现,血清型1、5、10、12、13和14型菌株能在96h内致死试验猪;血清型2、4和15接种SPF猪后剖检尸体可见严重多发性浆膜炎和关节炎;而血清型3、6、7、8、9和11接种SPF猪后无临床症状和损伤[8]。在日本、德国、美国、西班牙和加拿大以血清4型和5型最为流行;在澳大利亚和丹麦以血清5型和13型最为流行;目前已从北京、山东、黑龙江、宁夏、广东、辽宁、上海、河南、湖南、湖北等省市分离出副猪嗜血杆菌[9]。许多副猪嗜血杆菌菌株有类似于菌毛
6、的丝状结构,这些结构可能有助细菌侵入机体后粘附于细胞表面。Munch等[10]证明,副猪嗜血杆菌在体内传代后能生成菌毛样结构的物质,能黏附并侵入猪脑微血管内皮细胞。由于从表面健康猪的鼻腔中普遍能分离出这种细菌,菌毛的黏附作用是细菌入侵的开始这一概念受到质疑[11]。Miniats等[12]研究结果发现,用含有LPS和OMP抗原的菌苗免疫动物,有OMP抗体的猪才能抵抗强毒菌的攻击。这些事实表明,LPS可能不是副嗜血杆菌的主要毒力因子。Amanoh等[13]进一步研究了LPS的致病作用,用血清5型菌株接种动物后发现,血液中L
7、PS抗体的出现与血栓形成和弥漫性血管内凝血有关,这进一步说明副猪嗜血杆菌的LPS具有与其他革兰氏阴性细菌内毒素相似的活性。RuizA等[7]研究表明,外膜蛋白OMP与副猪嗜血杆菌的毒力有关,患病猪与健康猪中分离出的副猪嗜血杆菌的OMP不同,而引起多发性浆膜炎和关节炎症状的分离株的OMP基本相同。研究表明,免疫动物抗体的产生针对于OMP而不是LPS和CPS,说明OMP具有很好的免疫原性,但OMP是否为主要的免疫原仍需进一步研究。Charlnad等[14]研究结果证明了猪血清中转铁蛋白受体的存在,并分析了2种转铁结合蛋白(t
8、bp)的多肽结构分别是tbpA(94ku)和tbpB(94、60ku)。Hps含铁细胞利用tbp提供细菌生长必需的铁离子,tbp可能在Hps感染宿主动物引起发病过程中起决定性作用。LichtensteigerCA[15]在副猪嗜血杆菌的分泌液中提纯出这种有潜在毒力的神经氨酸酶,约为82ku,这进一步推动了副猪嗜血杆菌