复合型AD大鼠模型脑组织、血清及牙周组织中部分炎症因子的表达-论文.pdf

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1、Dec．2013．33(6)实验动物与比较医学LaboratoryAnimalandComparativeMedicine439doi：10．3969／j．issn．1674—5817．2013．06．005复合型AD大鼠模型脑组织、血清及牙周组织中部分炎症因子的表达尹秀华，一，姜珍l’2，刘天云，潘平，秦婷，夏春林-，孙茂民-，z(苏州大学医学部1．解剖学教研室暨细胞神经生物学研究室；2．实验动物中心，苏州215213)[摘要]目的初步探讨p．淀粉样蛋白1-42(AI]1—42)7LD．半乳糖(D—ga1)联合构建的复合型阿尔茨海默病(AD)模型中枢神经、血清及牙周组织的炎症因子的

2、表达。方法采用24只2月龄雄性SD大鼠，共分2组，腹腔注射及侧脑室注射生理盐水的对照组，腹腔注射D一2a1联合侧脑室注射AB一42建立的复合型AD模型组。Morris水迷宫实验检测大鼠的学习记忆能力，HE染色观察神经元数量和形态变化，ELISA方法检测脑组织各部分(皮质、海马)、血清及牙周组织中炎症因子(CRP，IL一1，IL一6，TNF．Oo。结果与对照组相比，复合型AD模型组大鼠海马、皮质中神经元形态皱缩，数量减少；CRP，IL一1，IL．6，TNF一0c表达水平升高，血清和牙周组织中的CRP，IL一1，IL一6，TNF．0c表达水平也升高<0．01)。结论建立复合型AD模型，可

3、较全面地模拟中枢神经炎症：牙周炎症可能参与了AD的发病进程。[关键词]D．淀粉样蛋白；D一半乳糖；阿尔茨海默病；炎症因子；SD大鼠[中图分类号]Q95—33[文献标识码]A[文章编号]1674．5817(2013)06—0439．05阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease，AD)是一马)、血清及牙周组织中炎症因子(CRP，IL一1，IL．6，类最常见的与年龄增大相关的中枢神经系统退行性TNF一0【)的表达，探讨其临床意义。疾病，其主要病理特征是神经元丢失、B淀粉样1材料与方法蛋白(Amyloidp，Ap)沉积以及大量异常磷酸化tau蛋白构成的神经纤维缠结和胶质细胞的活化⋯

4、。AD1．1实验动物和主要试剂的发病机制至今尚不清楚，目前发展的自由基致衰清洁级雄性SD大鼠24只，2月龄，体质量老研究理论以及炎症反应学说越来越引起重丰见_2】。150～200g，由苏州大学实验动物中心提供[SCXKHan等人报道早老素1／2双基因敲除小鼠后建立的(苏)2012—00051。随机分组后适应性饲养1周，室AD模型鼠脑及外周组织发生严重的早期炎症反应[5]。温18～24℃，相对湿度30％～40％，自由饮食和饮该模型模拟了与遗传相关的AD，其发生率比较水[SYXK(苏)2012—0045]。D一半乳糖(D—ga1)购于低，本实验室采用AB联合D．gal建立的AD大鼠模So

5、larbio公司、AB1—42购于Anaspec公司、HE染型，是散发型AD的成功模型，能较全面地模拟色试剂盒购于碧云天生物试剂公司；CRP、IL一1、AD行为学、组织学及生物化学特征㈣，在该模型IL一6、TNF一0【ELISA试剂盒购于R&D试剂公司；庆中是否也具有相似的中枢及外周的炎症反应呢?本大霉素(国药准字H37021973)购于山东鲁抗辰欣药研究通过ELISA方法检测脑组织各部分(皮质、海业有限公司。1．2动物分组及模型制作[收稿日期]2013—06—24将SD大鼠随机分为对照组、复合模型组，每[作者简介]尹秀华(1987一)，女，硕上研究生，E—mail：agbr@fox

6、mail．com组各12只。复合模型组大鼠每日先腹腔注射质量[通讯作者]孙茂民，硕十研究生导师，E—mail：xilin908@163．com百分浓度5％D—gal120mg／kg，对照组腹腔注射等440实验动物与比较医学LaboratoryAnimalandComparativeMedicine帚生理盐水。连续注射7周，第8周起将两组大鼠1．6脑组织及牙周组织CRP、IL-1、IL-6、TNF-0c腹腔注射质量百分浓度为4％水合氯醛0．8ml／100g的含量测定麻醉后，同定于脑立体定位仪上，参照包新民取大鼠各部分组织匀浆上清，根据ELISA说《大鼠脑立体定位图谱》选定侧脑室注射位点

7、，于明书所示操作方法，用酶标仪测定样品在450mm，J囟后0．8mm，中线旁开1．2mm，使用5微量注的吸光值(ooso)，根据标准品的结果绘制标准曲射器自颅骨表面垂直进针4．0mm。对照组侧脑室注线，直线吲归分析，得出其直线吲归方程。将测射无菌生理盐水2；复合模型组侧脑室注射A[31—42得的小同待检标本的A值代入相应的直线【u1归方程溶液2u1，缓慢注射，注射时间5min，留针5min，中，可得CRP、IL．1、IL一6、TNF．0c的含晕。缓慢撤针。