猪繁殖与呼吸综合征基因标记疫苗株NP49-ELISA鉴别诊断方法的建立-论文.pdf

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1、中国动物传染病学报2013，21(6)：12-18ChineseJoumalofAnimalInfectiousDiseases·研究论文·猪繁殖与呼吸综合征基因标记疫苗株NP49．ELISA鉴别诊断方法的建立孙晶，周艳君，徐彦召，姜一峰，童武，童光志(中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241)摘要：猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus，PRRSV)rHN4．A25+NP49株是新型基因标记弱毒疫苗候选株，为了配合对该基因标记疫苗免疫猪血清抗体的鉴别诊断，本研究以标记基因编码的NP49(新城疫病毒NP

2、蛋白C末端49个氨基酸，即NP49)多肽作为包被抗原，建立标记疫苗免疫猪血清中NP49抗体的ELISA鉴别诊断方法。通过对NP49一ELISA工作条件的优化，结果显示NP49一ELISA的多肽抗原最适包被浓度为500ng／孔，被检血清最佳稀释度为1：40。利用ROC曲线法确定S／P临界值为0．2，该方法批内与批间重复试验的变异系数均小于10％，与几种常见猪病阳性血清无交叉反应，具有较好重复性和特异性。本研究建立的NP49．ELISA鉴别诊断方法为猪繁殖与呼吸综合征新型基因标记疫苗的临床应用提供了有力保障。关键词：猪繁殖与呼吸综合征标记疫苗；多肽抗原；NP49一ELISA；鉴别诊断中图分

3、类号：S858．282．659．6文献标识码：A文章编号：1674—6422(2013)06．0012—07DEVELoPMENToFNP49一ELISAFORDIFFERENTIALDIAGNOSISFoRMARKERVACCINEAGAINSTPoRCINEREPRoDUCTIVEANDRESPIR【1oRYSYNDRoMESUNJing，ZH0UYan-jun，xUYan—zhao，JIANGYi—feng，TONGWu，TONGGuang—zhi(ShanghaiVeterinaryResearchInstitute,CAAs。Shanghai200241。China)Abst

4、ract：RecombinantvirusrHN4一A25+NP49strainisanewlydevelopedgeneticmarkervaccineagainsthighlypathogenicporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus(PRRSV)．ThemarkergeneNP49represents49aminoacidsatCterminalofNewcastlediseasevirusNPprotein．Reasonably,detectionoftheantibodiesspecificformarkergeneNP4

5、9woulddifferentiatevaccinatedpigsfromfieldvirusinfectedpigs．Todevelopadifferentaldiagnosis，synthesizedNP49peptidewasusedascoatingantigeninindirectELISA．Then，thedifferentialNP49一ELISAwasoptimizedforcoatingantigenconcentration，serumdilution，etc．TheoptimalcoatingconcentrationofNP49antigenwas500ng／w

6、ellandoptimalserumdilutionwas1：40．ThecriticalS／Pvaluewasdeterminedat0．2accordingtotheROCcurve．Theintra—andinter-assaycoeficientsofvariabilitybetweenexperimentswerealllessthan10％．Therewasnocrossreactionwithantibodiestootherswineviruses，indicatinggoodreproducibilityandspecificity．Resultshavedemons

7、tratedthatNP49一ELISAisareproducibleandspecificmethodfordiferentialdiagnosisofvaccinatedpigs，pavingapathwayforclinicalapplication收稿日期：2013-10-04基金项目：国家“863”计划项目(2011AAIOA208—2)；国际合作项目(2010DF33920)；科研院所技术开发研究专项资金(2012EG134237)