高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒基因缺失标记疫苗ELISA鉴别诊断方法的建立-论文.pdf

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1、中国动物传染病学报2014，22(1)：30—36ChineseJournalofAnimalInfectiousDiseases·研究论文·．．__JL—Cj同致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒基因缺失标记疫苗ELISA鉴别诊断方法的建立孙晶，周艳君，姜一峰，徐彦召，童武，童光志(中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241)摘要：为了配合(Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus，PRRSV)基因标记疫苗株(rHN4A25+NP49株)的临床抗体鉴别诊断应用，本研究以

2、标记疫苗中缺失的25个氨基酸多肽作为包被抗原，通过对ELISA反应条件的优化，确定抗原最适包被浓度为500ng／孔，血清最佳稀释度为l：40，同时确定其阴阳性临界值S／P判定标准为0．15，批内和批间重复实验结果显示其变异系数均低于10％，表明该方法具有良好的重复性。对临床血清检测结果显示与IDEXX试剂盒检测结果的符合率为94．84％，采用25aa负标记ELISA方法检测HuN4一F112免疫猪血清，结果显示从免疫后2ld可检测25aa特异性抗体，该抗体至少可持续存在126d。本研究建立的ELISA检测方法为今后PR

3、RSV基因工程标记弱毒疫苗株在l临床鉴别诊断的应用提供了有利保障。关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒；多肽抗原；25aa—ELISA中图分类号：$852．659．6文献标志码：A文章编号：1674—6422(2014)01—0030—07DEVELoPMENToFELISADIFFERENTIATIoNDIAGNOSISFORADUAL-MARKERVACCINEoFPoRCINEREPRoDUCTIVEANDRESPIRAToRYSYNDRoMEVIRUSSUNJing，ZHOUYan-jun，JIANGYi—f

4、eng，XUYan—zhao，TONGWu，TONGGuang—zhi(ShanghaiVeterinaryResearchInstitute,CAAS,Shanghai200241，China)Abstract：TodevelopaELISAmethodfordetectionofantibodyagainst25aainNsp2regionwhichwasdeletedfromadual—markerPRRSVvaccinestrainrHN4-A25+NP49．The25aapeptidewassynthesiz

5、edartificiallyandusedasantigentocoatthemicroplateforELISA．Theoptimalcoatingconcentrationofantigenwas500ng／wel1．optimalserumdilutionwas1：40，andthecutofS／Pvaluewas0．15．Thereproducibilitytestshowedthatthecoefficientsofvariationforintra—andinter-assaywerelowerthan10

6、％．25aa—ELISAmethodwasusedtotestclinicalsamplesandcomparedwithcommercialPRRSV-detection—kit(IDEXX)．Theresultsshowedthatcoincidenceoftwomethodswas94．84％．Then25aa—ELISAwasusedtotestHuN4一F112immunizedserumsamplesfrom1to126dayspostimmunization(dpi)．Specificantibodyag

7、ainst25aawasdetectedduring21to126dpi．ThevaccineimmunizedpigscouldbedifferentiatedfromnaturallyinfectedpigswithwildtypePRRSVs．Therefore，thisstudysetupafoundationforfurtherinvestigationofthedifferentiationdiagnosisforadual—markervaccinerHN4一A25+NP49．Keywords：Highl

8、ypathogenicPorcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus；peptideantigen；25aa—ELISA收稿日期2(113-l0-09基金项目国家863计划项目(2011AA10A2()8—2)；国家国际科技合作重点计划项目(2010DF3392())；科研院所技术开发