布鲁氏菌基因标记疫苗株的构建及鉴别pcr方法-毕业论文

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2、、青海两地,每年因布鲁氏菌病造成的直接经济损失达一亿元。而且它引起的人类波浪热、慢性感染以及反刍动物流产和睾丸炎等,至今尚无根治方法。此外,布鲁氏菌还被用作生物战剂,也可能被恐怖主义用来制造恐怖事件。由此可见,布鲁氏菌病对我国经济建设、人民健康生活、国家安全等存在着严重的威胁。约在80年代中期,世界布鲁氏菌病疫情开始回升,现已有40-50个国家和地区人、畜布鲁氏菌病疫情出现不同程度的波动。布鲁氏菌病疫情回升的地区主要集中在非洲、亚洲、南美洲和部分欧洲地区。近两年来,我国布鲁氏菌病的发病率已经超过历史最高水平,已引起

3、我国政府的高度重视。布鲁氏菌是布鲁氏菌病的病原体,它是一种胞内寄生的细小的球状杆菌,呈革兰氏染色阴性,无芽抱,有荚膜,无鞭毛不能运动,不呈两极染色。布鲁氏菌为呼吸型代谢,专性需氧,最适生长温度为37℃,最适生长的pH值为6.6-7.4。根据抗原性和主要宿主的不同,布鲁氏菌分为6种,19个生物型,其中对人致病的主要有羊种布鲁氏菌(B.melitensis)、牛种布鲁氏菌(B.abortus)和猪种布鲁氏菌(B.suis)。最近,在海洋哺乳动物体内分离到不同类型的布鲁氏菌,扩大了布鲁氏菌的宿主范围,这也许表示还存在不同

4、种型的布鲁氏菌。在我国流行的主要是牛、羊、猪种布鲁氏菌,其中牛种布鲁氏菌(B.abortus)和羊种布鲁氏菌(B.melitensis)主要引起牛和羊的流产和不孕。人布鲁氏菌病主要是来源于动物的布鲁氏菌病,是在与动物的接触过程中感染的。布鲁氏菌可通过完整皮肤粘膜进入宿主体内,不仅侵袭力强并在体内有很强的繁殖和扩散能力,这与该菌产生的透明质酸酶及荚膜的抗吞噬作用有关。细菌侵入人体后,被吞噬细胞吞噬,由于本菌具有荚膜,能抵抗吞噬细胞的吞噬杀灭,并能在该细胞内增殖。布鲁氏菌经淋巴管至局部淋巴结,待繁殖到一定数量后,突破淋

5、巴结屏障而进入血流,反复出现菌血症。由于内毒素的作用,病人出现发热、无力等中毒症状,随后细菌随血液侵入脾、肝、骨髓等细胞内寄生,血流中细菌逐步消失,体温也逐渐消退。细菌在细胞内繁殖至一定程度时,再次进入血流又出现菌血症,体温再次上升,反复呈波浪热型。由于布鲁氏菌主要在细胞内寄生,不被抗体消灭,也不受药物作用,治疗难于彻底,易转为慢性及反复发作,在全身各处引起迁徒性病变,并容易转成慢性,可迁延1-20年。布鲁氏菌病的发病特点是,一旦发病并转入慢性就无法根治,因此,布鲁氏菌病的预防对于控制布鲁氏菌病是第一位的。布鲁氏菌

6、病的预防主要通过接种疫苗实现的。现有的畜用减毒活疫苗有S19、104M、S2、M5和RB51等,死疫苗有牛种布鲁氏菌45/20,羊种布鲁氏菌H38等,人用活疫苗主要有19-B和104M等。现有的疫苗种类有死疫苗、减毒活疫苗等,但是应用效果比较好的还是减毒活疫苗,其它种类的疫苗虽也有人尝试,但效果均不好。我国目前使用比较广泛的减毒活疫苗株有羊种布鲁氏菌减毒疫苗株M5,猪种布鲁氏菌减毒疫苗株S2,以及牛用疫苗S19等,其中M5疫苗株是我国驯化出来的一株弱毒株,在我国的应用广泛,使用效果很好。在这些疫苗株的使用中还发现,

7、它们具有交叉免疫保护效果。例如,用羊种的M5来免疫牛和猪,也能获得较好的免疫保护效果。也有用S2来免疫羊和牛,发现产生较好的免疫保护。现有减毒活疫苗的广泛使用,对于预防布鲁氏菌病的发生、防止疫情进一步蔓延以及疫源地扩大等方面起到了关键性的作用。我国曾一度将布鲁氏菌病控制得很好,就是得力于大范围的使用疫苗预防的结果。但是,在这些疫苗使用过程中,也发现了一些问题,例如,现有的布鲁氏菌疫苗株虽然免疫保护效果较好,但是仍然存在着一定毒力,仍有偶发的免疫后发病。在一些地区,使用疫苗后发病率反而有上升。另一个比较重要的缺点是,

8、由于减毒活疫苗在抗原上与毒株没有大的区别,而布鲁氏菌病监测和检疫中主要采取的又主要是免疫学的方法,因此,无法区分是自然感染还是疫苗免疫,这就很难得出正确的监测和检疫的结果,给检测和检疫带来很大的困难。如何解决现有疫苗的这些问题,对于布鲁氏菌病的防控具有重要的意义。BP26是布鲁氏菌的一个非常重要的诊断抗原,已有很多用此抗原来进行布鲁氏菌诊断的报道。BP26抗

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