中药新药研究中多糖含量测定方法探讨-论文.pdf

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1、第39卷第l7期中圈中药杂志Vo1．39，Issue172014年9月ChinaJoun8lo{ChseMa~rlg~dleaSeptember，2014中药新药研究中多糖含量测定方法探讨李计萍(国家食品药品监督管理总局药品审评中心，北京100038)[摘要]该文结合新药申报中多糖测定方法中存在的问题，对多糖测定方法的适应范围、对照品的选择、各成分之间的干扰情况、方法研究进展等方面进行了介绍。作者建议：应根据所含多糖的结构及性质选择合适的检测方法，并进行方法学验证，考查所用显色试剂的稳定性、用量、显色时间、最大检测波长等因素，以增加方法

2、的准确性。在多糖的含量测定中应排除单糖及其他水溶性成分的影响；注意对照品的选择；测定波长的选择；关注中性糖和酸性糖测定时的相互干扰，必要时可加入糖抑制剂排除干扰。对于由不同糖残基构成的杂多糖的测定，由于不同单糖的标准曲线的斜率不同，在选择对照品时建议通过研究搞清组成多糖的单糖种类及比例，按此比例配制成混合对照品制作标准曲线，进行测定。[关键词]中药新药；多糖；含量测定尽管糖类物质的研究有百年的历史，但长期以来，人们也是目前研究中的一个难点。经典化学分析法中的葸酮硫仅把它作为一种能源及细胞结构的支撑物，过于低估了它生酸法、苯酚硫酸法、碘量

3、法、二硝基水杨酸法、氨基己糖测定命过程中的贡献。随着人类对生命科学深入研究，人们已逐法和己糖醛酸测定法等，以及各种色谱法都是通过水解单糖步意识到糖类物质在阐明多细胞生物高层次生命现象中的的含量来反映多糖的含量，实际测定的是总糖的含量。由于重要性和必要性，从而揭开了生物化学的一个重大前沿一一缺乏对照品，目前还不能使用HPLC和LPCE直接测定多糖糖生物学时代，糖类物质的研究已成为学者们关注的焦点。含量。另外，毛细管电泳技术近年来得到迅速发展开始用于糖的定量、定性测定是糖研究的一个重要基础工作。根据糖多糖的分析。Marsha首次报道用毛细管

4、电泳的激光诱导荧的理化性质，如折射率、比重、旋光性、显色反应等设计糖的光检测技术，直接测定大相对分子质量多糖，成功地分离了测定方法，可在一定范围达到所要求的测定目的。下面就现相对分子质量近200万的葡聚糖、褐藻胶等，但还有待进一阶段常用的方法中存在的问题进行讨论，以期找到应用于新步研究探讨。药研究中测定方法的结合点，更好的控制产品质量。2现阶段常用比色法方法中存在问题分析I研究状况2．1方法的适应性现阶段申报的资料中常用方法为蒽酮糖类物质是含多羟基的醛类或酮类化合物，以其水解的硫酸法、苯酚硫酸法、碘量法、二硝基水杨酸法、硫酸卡唑法、情况

5、分为单糖、寡糖和多糖。单糖是糖类的组成单元，单糖间羟基联苯法等，其中硫酸卡唑法、问羟基联苯法常用于测之间脱水形成糖苷键，并以糖苷键线形或分枝连接成寡糖和定酸性多糖。有一部分资料仅以葡萄糖为对照，直接用苯酚多糖。多糖是由1O个以上单糖基通过糖苷键连接而成。硫酸法测定多糖含量，实际测得的是总糖的含量，存在着方2—9个单糖基通过糖苷键连接而成的称作寡糖。由1种单法专属性、准确性问题。由于目前多糖制品多为未经纯化的糖组成的多糖称作均多糖，由2种以上单糖组成的多糖称作粗多糖制剂，其成分复杂，如含有蛋白质、生物碱、多糖的不杂多糖。按其性质又分为中性

6、多糖、酸性多糖、还原糖。同组分及其他水溶性成分，因此在测定时，应进行前处理，排早在20世纪4O—5O年代，对糖含量测定方法已进行了除干扰。有文献报道前处理时采用乙醇先进行醇沉提取众多的研究，常用的有比色法、滴定法、高效液相色谱法、气多糖，排除小分子物质、单糖、寡糖的干扰，再进行除蛋白步相色谱法、薄层扫描法、高效毛细管电泳法等，其中高效液相骤，以纯化和排除蛋白的干扰，再进行测定。尤其对于复方色谱法、气相色谱法、薄层扫描法、高效毛细管电泳法对研究制剂中多糖的含量测定更应增加前处理步骤，同时增加多糖多糖组成应用较多，进行含量测定还需进一步研究

7、完善。现对照品的薄层鉴别方法，规定在检查时不得检出单糖。阶段主要还是采用比色法及滴定法较多。但都不是测定多2．2对照品的选择苯酚．硫酸法测总糖含量是目前被广糖的专属性方法。多糖的含量测定是多糖类药物质量控制泛使用的一种经典方法，它适用于对单糖、寡糖以及均多糖中考察产品内在质量的项目，也是考察药品稳定性的依据，的含量测定。但对于均多糖，可直接以其组成糖作标准曲线。对于由不同糖残基构成的杂多糖，情况则较为复杂，实[收稿日期]2014-07-2l验发现，因为不同单糖的标准曲线的斜率不同，对于杂多糖[通信作者]李计萍，E—mail：lj9651

8、@163．eom采用此法在不同的条件下，其测得的结果均有差异。因此对·3392·第39卷第17期中圈中药杂右、VdS．39，Issue172014年9月eptember，2014照品的选择在比色法测定多糖含