鱼致病性舒伯特气单胞菌双重PCR检测方法的建立-论文.pdf

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1、第36卷第1期中国预防兽医学报VO1．36．No．12014年1月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineJan．2014doi：10．3969~．issn．1008—0589．2014．01．14鱼致病性舒伯特气单胞茵双重PCR检测方法的建立刘春，李凯彬，王庆，王芳，曾伟伟，石存斌，吴淑勤(中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部渔药创制重点实验室／广东省水产动物免疫技术重点实验室，广东广州510380)摘要：为快速准确鉴别检测鳢源致病性舒伯特气单胞菌(A．schubeaiO，本实验根据该茵的促旋

2、酶B亚单位基因(gyrB)、溶血素基因(hlyA)的保守序列设计引物，建立了检测致病性A．schubertii的双重PCR方法。结果显示gyrB和hlyA基因扩增产物分别为601bp和375bp；其最低检出茵体DNA量为2．3x10。ng，最低检出菌数为3×10cfu。特异性试验结果显示，该方法对温和气单胞菌、嗜水气单胞菌、无乳链球菌、诺卡氏菌、迟缓爱德华氏菌、荧光假单胞菌、柱状黄杆菌、哈氏弧茵以及类志贺邻单胞茵扩增结果均为阴性。应用该方法对37份，】盏床病料样品的检测结果与传统细菌分离鉴定结果的符合率为100％，表明该方法具有良好的特异性和敏

3、感性，可以应用于A．S曲ubeaii的快速检测和流行病学研究。关键词：舒伯特气单胞菌；gyrB基因；hlyA基因；双重PCR中图分类号：$852．61文献标识码：A文章编号：1008。0589(2014)01．0054-04EstablishmentofduplexPCRfordetectionofpathogenicAeromonasschubertiiL1UChun，LIKai-bin，WANGQing，WANGFang，ZENGWei—wei，SHICun-bin，WUShu-qin(KeyLaboratoryofFisheryDrugD

4、evelopmentofMinistryofAgncultural，KeyLaboratoryofAquaticAnimalImmuneTechnologyofGuangdongProvince，PearlRiverFisheriesResearchInstitute，ChineseAcademyofFisherySciences，Guangzhou510380，China)Abstract：TodeveloparapidmethodtodetectpathogenicAeromonasschubertiiinfish，aduplexPCRme

5、thodwasestablishedwithtwopairsofprimersdesignedaccordingtotheconservativesequencesofgyrBandhlyAgenesofA．schubertii，respectively．ByoptimizationofPCRconditions，theresultsshowedthattwoDNAfragmentsof601bp(gyrB)and375bp(hlyA)wereamplifiedfromthegenomicDNAextractedfromA．schubertii

6、bytheduplexPCR．withalimitdetectionof2．3×10。ngbacteriagenomicDNAor3xlOcfuofA．schubertii．Inaddition，thespecificitytestsshowedthattherewerenocross-reactionswithotherbacteriasuchasA．sobria，A．hydrophila，Streptococcusagalacfiae，Nocardiaseriolae，Edwardsiellatarda，PseudomonastTuores

7、cens，Flavobacteriumcolumnare，VibrioharveyiandPlesiomonasshigelloides．Moreover，themethodwasappliedtodetectclinicalsamplesandtheresultsshowed100％consistencewiththoseoftheconventionalbacterialisolationandidentificationmethod．Therefore，theduplexPCRcouldbeusedinquickdiagnoseandep

8、idemiologyinvestigationofA．schubertiiinfection．Keywords：Aeromonasschubertii