髓母细胞瘤与室管膜瘤脑脊液差异凝胶电泳方法的建立-论文.pdf

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1、中国实验诊断学2014年8月第18卷第8期～1239一文章编号：1007—4287(2014)08—1239—04髓母细胞瘤与室管膜瘤脑脊液差异凝胶电泳方法的建立李文臣，崔佳乐，李日。，罗毅男，洪新雨卜(1．吉林大学第一医院神经外科，吉林长春130021；2．吉林大学白求恩医学院组织学与胚胎学教研室，吉林长春130021；3．吉林大学公共卫生学院流行病与卫生统计学教研室，吉林长春130021)摘要：目的建立脑脊液双向差异凝胶电泳方法，寻找髓母细胞瘤脑脊液、室管膜瘤脑脊液与正常脑脊液三者之间的差异蛋白表达。方法选取3例已确诊髓母细

2、胞瘤患者脑脊液等体积混合为髓母细胞瘤组(M)；3例已确诊室管膜瘤患者脑脊液等体积混合为室管膜瘤组(E)；3例正常脑脊液等体积混合为正常对照组(CON)；分别采用1O％TCA／冰丙酮沉淀法除盐提取蛋白；蛋白等量混合为内标组(s)；将各组蛋白分别经花青染料Cy2、Cy3和Cy5标记，混合后进行双向差异凝胶电泳(2D-DIGE)，分别在波长488nm、532nm和633nm激发光下扫描，所获得图像用DeCy—der5．0图像软件进行蛋白质表达差异分析。结果DeCyder的胶内差异分析(DIA)模块显示胶1、胶2和胶3分别检测到1552

3、、1547和1566个蛋白质点。DeCyder的生物学差异分析(BVA)模块显示表达量变化超过两倍的差异蛋白质点，在髓母细胞瘤组与正常对照组中有36个；室管膜瘤组与正常对照组中有71个；而髓母细胞瘤组与室管膜瘤组中有52个。其中仅在髓母细胞瘤中上调的蛋白质点有8个，仅在室管膜组中升高的蛋白质点1O个。结论脑脊液双向差异凝胶电泳方法的成功建立，为髓母细胞瘤与室管膜瘤脑脊液中标志蛋白探寻研究奠定了基础。关键词：髓母细胞瘤；室管膜瘤；脑脊液；双向差异凝胶电泳中图分类号：R739．4文献标识码：AEstablishmentoftwo-d

4、imensionaldifferentialgelelectr0ph0resisusingcerebrospinalfluidfrompatientswithmedulloblas-tomaandpatientswithependymomaLIWen—chen，CUIJia—yue，LUOYi—nan，etal。(1．DepartmentofNeurosur—gery，FirstHospitalofJilinUniversity，Changchun130021，China；2．DepartmentofHistologyandEm

5、bryology，NormanBethuneCollegeofMedicineofJilinUniversity，Changchun130012，China)Abstract：ObjeetiveToestablishthemethodoftwo—dimensionaldifferentialgelelectrophoresis(2D-DIGE)andtofindoutthedifferentiallyexpressedproteinsincerebrospinalfluid(CSF)betweenmedulloblastoma，

6、ependymomaandnormalgroup．Methods3casesofCSFofmedulloblastoma(M)confirmedbypostoperativepathology。thenpooledbyequalamountasMgroup；3casesofCSFofependymoma(E)confirmedbypostoperativepathology，thenpooledbye—qualamountasEgroup；3casesofnormalcontrolCSF，thenpooledbyequalamo

7、untasCongroup．TheCSFsampleswereprecipitatedwithcold10TCA／acetone．Theinternalstandardcomprisedequalamountsofproteinsextractedfromthreegroups．InternalstandardandproteinsfromthethreegroupswerelabeledwithfluorescentdyesCy2，Cy3andCy5andthenpooled．2D-DIGEoflabeledsampleswe

8、rerun．2D-DIGEgelsscannedwith488nm，532nmand633nmwavelengthlaserwereanalyzedbyDeCyde5．0．ResultsDifferentialin-gelanalysis(DIA)moduleo