菘蓝和马蓝基因组DNARAPD指纹图谱的建立-论文.pdf

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1、中医药学报2013年第41卷第6期ActaChineseMedicineandPharmacologyVo1．41，No．6，2013菘蓝和马蓝基因组DNARAPD指纹图谱的建立于英君，肖井仁，姜颖，杨欣(黑龙江中医药大学，黑龙江哈尔滨150040)摘要：目的：采用RAPD法研究菘蓝和马蓝的遗传差异性，药材的真假和优劣。方法：利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术，对菘蓝和马蓝的基因组DNA进行了遗传差异性分析。结果：指纹图谱显示出了马蓝和菘蓝资源丰富的遗传多样性。结论：RAPD技术为鉴别中药材菘蓝和马蓝真伪和优劣提供了理论依据和现实意义。关键词：菘蓝；马蓝；RA

2、PD；遗传差异性中图分类号：R282．5文献标识码：A文章编号：1002～2392(2013)06—0026—02随着中国医药行业的迅速发展，人们越来越重视1．2．2DNA的浓度及纯度检测(uV一1700紫外可见中药材的鉴别，中药材的质量和真假直接影响着人们光分光光度仪)的身体健康，甚至影响着人们的生命安危，很早人们用取待测样品3001xL，用蒸馏水稀释l0倍，加人到自己多年的经验看药材表面、看颜色、看断面等来鉴别石英比色皿中，放人待测室的池架上，测定260nm、药材的真假和好坏，随着分子生物学的快速发展，人们280nm波长时的OD值，并计算出DNA的浓度及又从分子

3、水平上来鉴别药材的真假，其中RAPD技术OD260／OD280的比值。(randomamplifiedpolymorphieDNA)‘-3]是2O世纪901．2．3琼脂糖凝胶电泳检测DNA完整性年代发展起来的分子标记技术，RAPD技术有许多优0．8％琼脂糖凝胶：取0．8g琼脂糖溶于100mL1×点，能准确的证明供试材料间DNA的特征性和差异TAE缓冲液，加热至完全溶解，等待琼脂糖凝胶液冷性，具有操作简便、灵敏性高、省时省力、不易受环境因却至5O～60℃，缓慢倒人电泳槽，防止出现气泡，等胶素的影响等优点，目前该技术被广泛应用到中药材中，液完全凝固后轻轻的拔下梳子，将其

4、放入电泳槽中，向也为中药现代化的快速发展提供理论依据和现实电泳槽中加入1xTAE刚好高于胶面1～2mm，插上电意义。源，打开电泳仪，开机预热10min，让缓冲液充分混合。1材料与方法琼脂糖凝胶电泳上样缓冲液：取DNA5IxL和1．1实验材料1~LGel—DyeSuperBufferMix混合，混合均匀后直接供试材料为菘蓝(IsatistinctoriaL)和马蓝(Strobi—上样电泳，直接取1kbDNAmarker5L上样电泳，估lanthescusia(Nees)Ktze．)，经黑龙江中医药大学王振计片段大小，将电压调到8O一100V，电泳4O一50min，月教

5、授鉴定，材料用硅胶干燥室温保存。详见表1。当Gel—DyeSuperBuffer移到距凝胶前沿约2cm处，表1供试材料停止电泳。观察拍照，检测DNA的完整性。药品名及编号产地来源拉丁学名1．2．4随机扩增引物的筛选1菘蓝黑龙江省哈尔滨栽培品种~atistinctonaL从30个RAPD随机引物中进行筛选，先用样品比2马蓝广西壮族自治区栽培品f~gStrobilanthescusia(Nees)Ktze较多的菘蓝进行筛选，选取电泳条带清新、稳定的随机引物，用于PCR扩增和遗传差异的分析。1．2方法1．2．5RAPD随机扩增反应1．2．1CTAB法提取基因组DNA操作步

6、骤PCR循环详见康为世纪公司产品说明书。94℃30s172℃南lOmin3⋯7℃3⋯0s}f4～1cycles收稿日期：2013—09—27修回日期：2013—10—2172oC80sJ作者简介：于英君(1953一)，男，教授，主要从事中药有效成分抗肿瘤作用及延缓衰老作用。通讯作者：杨欣(1987一)，女，博士研究生，主要从事分子生物学研究。