妊娠相关血清蛋白A光激化学发光免疫分析法的建立-论文.pdf

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1、分子诊断与治疗杂志2014年1月第6卷第1期JMolDiagnTher,January2014，Vo1．6No．137●论著●妊娠相关血清蛋白A光激化学发光免疫分析法的建l‘—黄莉萍周燕莉’邹丽萍刘天才董志宁钟梅吴英松【摘要】目的采用光激化学发光免疫分析技术(AlphaLISA)建立快速定量检测妊娠相关血清蛋白A(PAPPA)的方法。方法用两株配对的PAPPA单克隆抗体，一株PAPPA单克隆抗体包被受体微球，另一株PAPPA单克隆抗体用生物素标记，与链霉亲合素的供体微球共同组成检测试剂。结果自制PAPPA试剂分析灵敏度为1．365mU

2、／L，线性测量范围为1．365～10000mU／L，分析内和分析间的精密度分别为5．61％-6．51％和2．07％～4．82％，与AFP、RPL、HPL和HCG无明显交叉反应。使用自制试剂对853份9-13周的正常孕妇血清进行检测，建立了孕妇血清在不同孕周时的中位数水平，为正常值参考范围的确定提供了一定依据，其中165份临床血清样本使用自制试剂与PerkinElmer公司PAPPATRFIA诊断试剂盒同时进行检测，结果具有相关性(r=0．987)。结论自制PAPPA光激化学发光免疫分析试剂的各项性能指标均能达到临床检测要求，有望替代国

3、外同类产品。【关键词】妊娠相关血清蛋白A；光激化学发光；测定Developmentofanamplifiedluminescentproximityhomogeneousimmunoassaykitforthedetectionofpregnancy—associatedplasmaprotein—AinhumanserumHUANGLiping，ZHOUYanli‘，ZOULiping，LIUTiancai，DONGZhining，ZHONGMei，WUYingsong(1．DepartmentofObstetricsandGyne

4、cology,NanfangHospital，SouthernMedicalUniversity,Guangdong，Guangzhou510515，China；2．SchoolofBiotechnology,SouthernMedicalUniversity,Guangdong，Guangzhou510515，China)[ABSTRACT】ObjectiveToestablishanamplifiedluminescentproximityhomogeneousimmunoassay(AlphaLISA)forthedetermi

5、nationofpregnancy—associatedplasmaprotein-A(PAPPA)inhumanserum．MethodsTwoanti．PAPPAmonoclonalantibodieswereusedtodevelopthesandwichAlphaLISAkitfordetectionofPAPPAinserum．OnewascoatedonAlphaLISAacceptorbeadsandtheotherwasbiotinylated．Thekitalsocontainsdonorbeadscoatedwit

6、hstreptavidin．Theoptimaltestconditionsandanalyticalperfornlanceofthemethodwerestudied．ResultsTheanalyticalsensitivityofAlphaLISAforPAPPAwas1．365mU／L．Themeasurerangeofdevelopedkitwas1．365-10000mU／L．Theintra—assayandinter-assaycoefficientofvariationwere5．61％-6．51％and2．07％

7、-4．82％，respectively．Yherewasnocross—reactiontoAF只RPL，HPLandHCG．853maternalserlMnsamplesofninetothirteenpregnantweeksweretestedusingreagentsmadebyourselves．Medianvaluesduringdifierentweeksandthereferencevaluewereestablished．Thecorrelationcoefficientofbloodsamplesdetectio

8、nresultsbetweenhome—madeandcommercialPAPPATRFIAkitsfPerkinElmerwas0．987．ConclusionThisnewdevelopedPAPPAAlphaLI