人结直肠癌耐奥沙利铂细胞株的建立及特性-论文.pdf

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1、第23071卷4年第6月3期遵义医学院学报Vol-37No．3JournalofZunyiMedicalUniversityJun．2014人结直肠癌耐奥沙利铂细胞株的建立及特性文坤明，傅仲学(1．遵义医学院附属医院胃肠外科，贵州遵义563099；2．重庆医科大学第一附属医院胃肠外科，重庆400016)[摘要]目的建立人结直肠癌耐奥沙利铂细胞株，检测该细胞株的多药耐药性及其可能的机制。方法在人结直肠癌细胞株SW480(亲本细胞)的培养液中，逐渐提高化疗药物奥沙利铂(Oxa)浓度，建立稳定的耐药细胞株(SW480／OxR)，采用细胞增殖试剂WST一1检测细胞对化疗药物Oxa和5一Fu

2、的敏感性；实时荧光定量PCR检测MDR一1、Survivin及Oct4的mRNA表达水平；流式间接法检测P—gP、Survivin蛋白阳性细胞比例；Westernblot方法检测Oct4蛋白表达。结果WST一1检测细胞增殖结果为：耐药细胞加药(Oxa及5一FU)72h后细胞数量变化不大(P>0．05)；耐药细胞MDR—l、Survivin和Oct4的mRNA水平，P—gP+及Survivin+细胞比例以及Oct4蛋白水平均明显高于亲本细胞(P<0．01)。结论耐药细胞具有多药耐药特性，可能与高表达耐药蛋白P—gP、抗凋亡蛋白Survivin及干细胞转录因子Oct4有关。[关键词]结

3、直肠癌；奥沙利铂；多药耐药[中图法分类号]R735．3[文献标志码]A[文章编号]1000—2715(2014)03-0324-05Establishmentandcharacteristics0foxaliplatin—resistanthumancolorectalcancercelllinesWenKunming，FuZhongxue(1．DepartmentofGastrointestinalSurgery，TheAfiliatedHospitalofZunyiMedicalUniversity，ZunyiGuizhou563099，China；2．Departmentof

4、GeneralSurgery，TheFirstAfiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity，Chongqing400016，China)[Abstract]ObjectiveToestablishastableoxaliplatin—resistanthumancolorectalcelllinesandinvestigatethemulti—drugresistanceofthesecelllinesandthepossiblemechanisms．MethodsOxaliplatin—resistant(SW480／OxR)cell

5、sweregeneratedbyculturingSW480celllines(namedasparentalcells)withtheincreasedoxaliplatin(Oxa)concentrations．ThesensitivityofcellstoOxaand5一FUwasevaluatedusingtheWST一1re—agent．ThemRNAexpressionsofMDR一1，SurvivinandOct4wereanalyzedbyreal—timequantitativePCR(RT—qPCR)．ThepercentageofP—gP(drug～resis

6、tanceassociatedprotein)一andSurvivin(anti—apoptoticpro—tein)一positivecellswasmeasuresbyindirectmethodoffloweytometry．TheOct4(stemcellrelatedtranscriptionfactor)proteinlevelwasdetectedbyWesternblottingassay．ResultsSeventy—twohafterexposuretoOxaand5一FU，thenumberofSW480／OxRcellswasnotapparentlycha

7、nged(P>0．05)，whilethenumberofthepaten—talcellswassignificantlyreduced(P<0．01)．ThemRNAexpressionsofMDR一1andSurvivin．thepercentage0fP—gP—andSurvivin—positivecellsandthemRNAandproteinlevelsofOct4inSW480／OxRcellsweresig—nificantlyincreasedt