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1、第24卷,第8期光谱学与光谱分析Vol124,No18,pp99129942004年8月SpectroscopyandSpectralAnalysisAugust,2004黄酮化合物的偶氮显色反应及其应用研究12111余倩,陈小康,罗宗铭,杨迟,麦桦坤11广东工业大学轻工化工学院,广东广州51009021韶关学院化学系,广东韶关512005摘要在pH1014的NH4Cl2NH3·H2O缓冲溶液中,对磺基氯化重氮苯可与芦丁,桑色素,染料木甙,槲皮素,橙皮甙,黄岑甙和大豆甙等7种黄酮化合物发生偶氮显色反应,反应产物的最大吸收波长,除黄岑甙为380nm外,其余均在430nm,显色反应的
2、灵敏度依上述顺序逐渐减弱。其中芦丁的摩尔吸收光系数最4-1-12-1-1大,为3128×10L·mol·cm,大豆甙摩尔吸光系数最小,为8130×10L·mol·cm。提出的分光光度分析方法,用于槐米和豆粕中黄酮化合物的测定,RSD为0125%～4148%,回收率在9913%～10510%之间。主题词黄酮化合物;偶氮显色反应;分光光度法;槐米;豆粕中图分类号:O626;O64411文献标识码:A文章编号:100020593(2004)0820991204黄酮化合物广泛存在于许多中草药和植物食品中,它具均置冰箱中保存。[124]有显著的生物活性,在药物及保健食品中有重要的应用112
3、实验方法[5,6]价值。黄酮的分析方法多用色谱法和毛细管电泳法,铝在一系列10mL比色管中加入1mL对氨基苯磺酸溶液[7](Ⅲ)盐螯合显色的分光光度法由于方法比较简便,在测定和3mL亚硝酸钠溶液,摇匀。10min后分别加入各种黄酮-1不同产品中的总黄酮应用比较广,但方法的灵敏度不高,且对照溶液2mL,用215mol·LNaOH溶液调pH约为10,对某些异黄酮化合物不能测定,因而应用受到限制。加入NH4Cl2NH3·H2O缓冲溶液115mL,用水稀释至刻度,本文根据不同黄酮化合物某些共同的结构特点,研究了摇匀。10min后用1cm比色皿,以试剂空白作参比,除黄甙黄酮化合物的偶氮显色
4、反应,提出了一种新的光度分析法,在380nm外,其余黄酮化合物均在430nm测定吸光度。它比铝(Ⅲ)盐光度法的灵敏度高,并可用于异黄酮的测定,使分光光度法测定黄酮化合物的实用性增强,应用范围扩2结果与讨论大。211吸收光谱1实验部分按实验方法绘制的各种黄酮偶氮化合物的吸收光谱如图1。从图1看出,研究的7种黄酮的偶氮化合物,除黄岑甙111仪器及试剂偶氮化合物的最大吸收波长λmax在380nm外,其余的λmax721型分光光度计(上海第三分析仪器厂);PHS23C型酸度计(萧山分析仪器厂)。-1对氨基苯磺酸溶液:用012mol·LHCl溶液配成610g-1-1·L的溶液;亚硝酸钠溶液
5、:110g·mL水溶液,置于冰箱中保存;NH4Cl2NH3·H2O缓冲溶液:30gNH4Cl加65mL氨水配成500mL溶液,在酸度计上调pH=1014。黄酮对照溶液:分别取芦丁、槲皮素、橙皮甙、黄岑甙(均为中国药品生物制品所),桑色素(Marck公司),染料木Fig11Absorptionspectraofazo2compoundsofflavonoids甙(Sigma公司)和大豆甙(昆明植物所),用30%乙醇溶液配1,Morin;2,Quercetin;3,Rutin;4,Genistin;5,Hesperidin;-1-1成015g·L的储备液,使用时稀释成20mg·L的使
6、用液,6,Baicalin;7,Daidzin,Abovecompoundstobeazo2compound收稿日期:2003212216,修订日期:2004205206基金项目:国家自然科学基金(20105003)和广东省自然科学基金(980128)资助项目作者简介:余倩,1964年生,广东工业大学轻工化工学院副教授992光谱学与光谱分析第24卷-1均在430nm。当浓度为410mg·L质量浓度,各黄酮偶氮21212反应温度化合物的吸光度按桑色素、槲皮素、芦丁、染料木甙、橙皮重氮盐一般在温度较低时比较稳定,但对位有磺酸基的[8]甙、黄岑甙和大豆甙的顺序依次减弱,如果用摩尔浓度计
7、算重氮苯可在常温下保持稳定,因此,偶联反应只需在常温各黄酮偶氮化合物的摩尔吸收光系数,则以芦丁为最大,槲下进行即可。实验表明,反应温度不超过40℃,偶氮产物的皮素是芦丁的甙元,摩尔吸收光系数却比芦丁小,说明芦丁吸光度均为最大恒定值。的偶氮显色灵敏度比槲皮素高。21213反应时间及产物的稳定性212偶氮显色反应条件重氮反应和偶联反应的速度都比较快,在5min内反应21211反应酸度产物的吸光度即可达最大恒定值,且至少在12h内吸光度保黄酮的偶氮显色反应分两步进行,首先在酸性介质亚硝
