崂山奶山羊胎儿成纤维细胞SOD1和APOE基因差异表达分析-论文.pdf

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1、动物科学现代农业科技2014年第12期崂山奶山羊胎儿成纤维细胞SoD1和APOE基因差异表达分析钟永本王娟红(，青岛科技大学高密校区，山东高密261500；甘肃农业大学)摘要选择SOD1和APOE基因。研究其在不同代数奶山羊胎儿成纤维细胞中盼差异表达。分别收集正常生长的第F2、F8、F16、F32、F40、FS0代胎儿成纤维细胞，提取细胞总RNA。采用RT-PCR技术及实时荧光定量PCR技术检测不同代数崂山羊胎儿成纤维细胞SOD1和APOE基因的表达．结果表明：崂山奶山羊SOD1和APOE基因在第2代成纤维细胞中表达水平最高，随着传

2、代次数的增多，表达量逐渐下降。第50代表达量最低，而且SOD1和APOE基因的表达趋势完全一致，由此表明SOD1和APOE基因在不同代数崂山奶山羊胎儿成纤维细胞中有选择表达的趋势。为进一步揭示细胞衰老机制提供参考。关键词崂山奶山羊：胎儿成纤维细胞；SODl；APOE；荧光定量中图分类号$813文献标识码A文章编号1007—5739(2014)12—0268—01人们在研究模式生物老化机理的过程中，发现各个器异性片段，产物经琼脂糖凝胶电泳检测。SOD1和APOE基官的老化及机体的衰老受一些特定基因的调控。该文对崂因在第2代崂山奶山羊胎

3、儿成纤维细胞中的含量最高，随山奶山羊胎儿成纤维细胞SOD1和APOE基因差异表达进着细胞传代次数的增加，SOD1和APOE基因表达量有逐渐行分析，以为进一步揭示细胞衰老机制提供参考。下降的趋势。第50代二者表达量最低。1材料与方法2．4实时荧光定量检测结果1．1试验材料通过△Ct法来表明SOD1和APOE基因在奶山羊胎儿主要试剂有DMEM(Gibco)，胰蛋白酶(Biotopped)，成纤维细胞中表达【2J。SOD1和APOE基因在第2代崂山奶SYBR⑧PremixExTaII试剂盒。山羊胎儿成纤维细胞的表达量最高，随着细胞传代次数

4、的1．2试验方法增加，二者表达量均逐渐下降，其中第50代表达量最低，与1．2．1崂山奶山羊胎儿成纤维细胞的分离和体外培养O从RT．PCR结果相一致。怀孕40日龄的奶山羊取出胚胎．将胎儿进行实验室原代及3结论与讨论传代培养。试验以崂山奶山羊SOD1和APOE作为候选基因。以胎1．2．2总RNA．的提取及质量检测。采用Trizol法提取崂山儿成纤维细胞为素材。通过荧光定量PCR检测SOD1和奶山羊第2、8、l6、32、40、5O代胎儿成纤维细胞总RNA。APOE基因在不同代数崂山奶山羊胎儿成纤维细胞中的表1．2．3总RNA的反转录。用反

5、转录试剂盒分别将不同代数达情况。结果表明：SOD1和APOE基因在崂山奶山羊不同代数胎儿成纤维细胞的表达不同。SOD1和APOE基因在第的总RNA反转录成cDNA。2代崂山奶山羊胎儿成纤维细胞中含量最高。随着传代次数1．2．4引物设计及PCR反应。参照GenBank中公布的奶山的增多表达量逐渐降低，其中第50代最低。分析可能是在羊SOD1基因序列(NM_001285550)和APOE基因序列第2代细胞新陈代谢快，产生ROS、脂质类物质等相对较(XM_005701775)，用Primer3(v．0．4．0)在线软件设计特异性多，需更多

6、的SOD1和APOE将其清除或运输走。随着传代引物。次数的增多。虽然细胞仍保持一定的分裂能力，但新陈代谢使用特异性SOD1上下游引物和APOE上下游引物分变得缓慢，细胞的各种功能开始退化，出现衰老现象D叫。因别对2～5O代的崂山奶山羊胎儿成纤维细胞进行PCR扩增此，SOD1和AP0E基因在不同代数崂山奶山羊胎儿成纤维反应。细胞中含量的变化可用作断定细胞是否衰老死亡的一个非1．2．5荧光定量PCR。实时荧光定量PcR检测SOD1和常重要的指证。试验研究了崂山奶山羊SOD1和APOE基因APOE基因的表达量。在不同代数胎儿成纤维细胞中的

7、表达，其结果具有重要2结果与分析意义，可以为将来研究人类衰老疾病而建立细胞模型提供2．1细胞培养参考。根据2种细胞对胰蛋白酶的耐受性不同，通过差速消4参考文献化和差速贴壁法可获得纯化的成纤维细胞【】1，传至F2代时[1]刁睿鑫，张勇，胡俊杰，等．双峰驼胎儿耳缘组织成纤维细胞系的建立即可获得纯成纤维单层细胞。及其生物学特性鉴定啊．兽类学报，2012，32(4)：340—346．2．2总RNA提取、浓度测定结果[2]王春花，刘克明，张明月．SOD基因表达与衰老的相关性[J]．中国公共卫生，2004，20(8)：953—954．提取的总R

8、NA通过琼脂糖凝胶电泳后呈现3条带，分【3】张艳丽，许丹，庞训胜，等．奶山羊胎儿成纤维细胞的分离培养及脂质别为28s、18s、5s；且28s比18s的亮度大2倍，AA瑚在体法转染研究叨．南京农业大学学报，2010(1)：81—86．[