粪大肠菌群检测方法中酶底物法封口技术的改进-论文.pdf

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1、环境科学导刊http：／／hjkxdk．yies．org．en2014，33(增刊)CN53—1205／XISSN1673—9655总大肠菌群／粪大肠菌群检测方法中酶底物法封口技术的改进李宗全，黄芳，许江(镇雄县环境科研监测站，云南镇雄657200)摘要：通过试验，验证了在科立得固定底物技术酶底物法检测大肠茵群／粪大肠茵群的方法中，可使用家用电熨斗替换专用程控定量封口机进行封口，且经济、方便。关键词：总大肠菌群；检测；专用程控定量封口机；家庭用电熨斗；技术；改进中图分类号：X83文献标识码：A文章编号：1673—9655(2014)增刊一0090—021引言一问题

2、，现根据专用程控定量封口机封口的原理，专用程控定量封口机是酶底物法定量检测总大利用价钱廉价得多的家庭用电熨斗(150元左右)肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的必备设备，替换专用程控定量封口机，对该方法的封口技术进其原理是封口机在一定温度下(约200cI二左右)经行改进，并进行检测试验对照比较。上下碾对定量盘进行封口。2材料与方法酶底物法(enzymesubstratetechnique)采用大2．1材料肠菌群能产生p一半乳糖苷酶(B—D—galactosi—科立得试剂，100ml取样瓶，97孔定量盘，97dase)分解ONPG(ontho—nitrophenyl—

3、B—D—孔橡胶垫，专用程控定量封口机，家用电熨斗，圆galactosidase)使培养液呈黄色，以及大肠埃希氏形滚筒，恒温培养箱。菌产生B一葡萄糖醛酶(B—glucuronidase)分解2．2方法MUG(4一methyl—umbelliferyi—B—D—glucuroni—(1)准备多个总大肠菌群不同浓度的水样，dase)，使培养液在波长360mm紫外光下产生荧光每个浓度取4个平行样，每个水样100ml；的原理，来判断水样中是否含有大肠菌群和大肠埃(2)将一包科立得试剂倒入装有100ml水样希氏菌。2006年经国家疾病预防控制中心环境与的无菌取样瓶中，盖上盖子

4、，充分摇匀；健康相关产品安全所的对比试验，证明该方法操作(3)将水样全部到入97孔定量盘中；简便，安全可靠，性能优良；操作简便、检测时间(4)按原方法将97孔定量盘使用专用的程控短(18—24h)，无需确认试验，可同时检测水中定量封口机进行封口，每个浓度做两个平行样；大肠菌群和大肠埃希氏菌，能够较为准确地判断水(5)将装有水样的9r7孔定量盘平放在97孔橡胶样中的微生物污染状况。酶底物法作为一种比较成垫上并保持水平，用圆形滚筒从97孔定量盘小孔底熟的方法，已被许多国家、地区和组织推荐使用，部平行往大孔开口处缓慢滚动碾平，重复1—2次并于2006年列入我国颁布的《生

5、活饮用水标准检(必要时将定量盘上方稍微向上抬起观察最上面一排验方法GB／T5750．12—2006)中。孔是否都有样品，若有一孔无样品则将定量盘上方微但是该方法中的重要设备专用程控定量封口机抬高，使定量盘上部样品往下流然后重新进行滚动碾因为价钱昂贵(4～5万元)，一般一个单位只采购平步骤)，用调到4档(约200~C±lOT：)的家用电熨1台，在专用程控定量封口机坏后需要送往该仪器斗从9r7孔定量盘小孔底部平行往大孔开口处熨烫，销售公司总部进行维修。由于地理位置和交通运输并重复1次，每个浓度做两个平行样；等原因，许多偏远地区一个修理来回需要一个月甚(6)将封好口的9

6、7孔定量盘，放在温度为36至更长时间，使得关于该项目的检测工作会出现一-I-1℃的培养箱中培养24h。段时间的停止状况，造成工作中的不便。为解决这3结果与分析3．1对30件地表水中大肠菌群的监测结果(表1)收稿13期：2013—11一O1—90一http：／／hjkxdk．yies．org．cn总大肠茵君粪大肠茵群检测方法中酶底物法封口技术的改进李宗全表1两种方法的监测结果(~／lOOm1)3．2分析对检测的30件水样中大肠菌群结果进行成对数据检验，结果表明专用程控定量封口机封口与家用电熨斗封口两种方法检测结果无统计学上的差异(P=0．111)，两种方法检出的大肠

7、菌群趋于一致。对两种方法检测出的结果进行线性回归分析，回归分析结果表明：回归系数t=一1．645，P=0．111>0．05，即差异无显著性意义，两种方法没有区别。从检测结果分析得知所检测单样结果均在95％置信限值内，均值基本一致。专用程控定量封口机与家用电熨斗的综合对比见表2。表2专用程控定量封口机与家用电熨斗的综合对比由表2对比得出家用电熨斗在价格、维修和预热时间方面均优于专用程控定量封口机。4结论在科立得固定底物技术酶底物法检测大肠菌群的方法中，使用家用电熨斗替换专用程控定量封口机的封口方法可有效地进行封口，检测结果与使用专用程控定量封口机的结果一致，且经济、

8、方便、适用