(2017-12-08)标准_水质 粪大肠菌群的测定 酶底物法（征求意见稿）

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1、ICS13.060.70Z16DB61陕西省地方标准DB61/XXXXX—XXXX水质粪大肠菌群的测定酶底物法Waterquality—Determinationoffecalcoliforms—EnzymesubstratemethodXXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施陕西省质量技术监督局发布DB61/XXXXX—XXXX前言本标准由陕西省环境监测中心站提出。本标准由陕西省环境保护厅提出归口。本标准起草单位：陕西省环境监测中心站。本标准主要起草人：许锋、张会强、刘敏、周弛、吴卫东、马文鹏、张秦铭、张炜、宁西翠、宋文斌、丁

2、义志、白慧莉。本标准由陕西省环境监测中心站负责解释。本标准的附录A、B、C均为规范性附录。本标准为首次发布。11DB61/XXXXX—XXXX水质粪大肠菌群的测定酶底物法1　范围本标准规定了水中粪大肠菌群测定的酶底物法的方法原理、分析步骤、结果计算等要求。本标准适用于地表水、水源水、生活污水和废水中粪大肠菌群的测定。当接种量为300ml时，本方法的检出限为3MPN/L；当接种量≤100ml时，检出限为10MPN/L。2　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的

3、引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法HJ/T347-2007水质粪大肠菌群的测定多管发酵法和滤膜法（试行）HJ755-2015水质总大肠菌群和粪大肠菌群的测定纸片快速法GB/T5750.12-2006生活饮用水标准检验方法微生物指标HJ493-2009水质样品的保存和管理技术规定HJ494-2009水质采样技术指导3　术语和定义3.1　酶底物法（enzymesubstratemethod）粪大肠菌群（fecalcoliforms）在选择性培养基上培养能产生β-半乳糖

4、苷酶（β-D-galactosidase），该酶可以分解色源底物释放出显色基团，通过颜色变化进行定性，通过MPN法进行定量。3.2　粪大肠菌群（fecalcoliforms）粪大肠菌群，又称耐热大肠菌群（thermotolerantcoliforms）。是指在44.5℃下培养24h，能产生β-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase）,分解选择性培养基中的邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷（ONPG）生成黄色的邻硝基苯酚的肠杆菌科细菌。3.3　最大可能数（mostprobablenumber,MPN）最大可能数，是基于统计学理论间接估

5、计水体中大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。根据一定体积不同稀释度的样品经培养后产生的目标细菌的阳性数，查统计学推算的MPN表，估算出一定体积样品中目标细菌的最大可能数。4　方法原理11DB61/XXXXX—XXXX根据水样污染的程度，选择接种量为300ml或接种量≤100ml两种方式接种水样。将接种好的取样瓶、试管或经封口的51或97孔定量孔板置于恒温培养箱中44.5℃±0.5℃下培养24h±2h。当细菌生长繁殖时，粪大肠菌群能产生特定的β-半乳糖苷酶，选择性分解培养基中邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷（ONPG）产生黄色的邻硝基苯酚（O

6、NP）。当接种量为300ml时，根据出现阳性的取样瓶数、试管数查MPN表（附表A）可得每升水样中粪大肠菌群数；当接种量≤100ml时，根据51孔或97孔定量孔板的阳性孔格数查MPN表（附表B或C），再除以样品稀释度，计算水样中粪大肠菌群的浓度值。1　试剂与材料除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682中规定的一级水。1.1　培养基选择市售商品化酶底物法试剂，或参照GB/T5750.12-2006中规定的基本成分配制。每1000ml培养基中所含基本成分见表1。表1　酶底物法培养基的基本成分成分分子式或缩写含量硫酸铵（NH4

7、）2SO45.0g硫酸锰MnSO40.5mg硫酸锌ZnSO40.5mg硫酸镁MgSO4100mg氯化钠NaCl10g氯化钙CaCl250mg亚硫酸钠Na2SO340mg两性霉素BAmphotericinB1mg邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷ONPG500mg4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷MUG75mg茄属植物提取物Solanium萃取物500mgN-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙磺酸钠盐HEPES钠盐5.3gN-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙磺酸HEPES6.9g1.2　硫代硫酸钠（Na2S2O3）1.3　乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na

8、2）1.4　氯化钠（NaCl）1.5　硫代硫酸钠溶液：ρ（Na2S2O3）＝0.10g/ml。称取硫代硫酸钠（5.2）10g，适量水溶解，定容至100ml，临用现配。1.6　乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na