水质 肠球菌的测定 固定底物技术酶底物法（报批稿）

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1、ICS13.060B21DB21辽宁省地方标准DB21/T****—2019水质肠球菌的测定固定底物技术酶底物法Waterquality—DeterminationofEnterococci—Definedsubstratetechnologyenzymesubstratemethod（报批稿）20XX-XX-XX发布20XX-XX-XX实施辽宁省市场监督管理局发布DB21/T****—2018目  次前言II1范围12规范性引用文件13术语和定义14方法原理15试剂和材料26仪器和设备27样品38分析步

2、骤39结果计算与表示410精密度和准确度411质量保证和质量控制512废物处理513注意事项5附录A67DB21/T****—2018前  言本标准依据GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》起草制订。本标准附录A为规范性附录。本标准由大连市市场监督管理局提出。本标准由辽宁省生态环境厅归口。本标准起草单位：大连市环境监测中心、国家海洋环境监测中心。本标准主要起草人：王中卫、明红霞、李翔宇、沈学崴、李玉璞、苏洁、曲翊、王琳琳、刘子成、孙沛雯、刘景泰、韩佳。7DB21/T****—

3、2018水质肠球菌的测定固定底物技术酶底物法1　范围本标准规定了测定水中肠球菌的固定底物技术酶底物法。本标准适用于地表水、地下水、饮用水、海水、生活废水和工业废水中肠球菌的测定。本标准的检出限：地表水、地下水、饮用水、生活废水、工业废水样品的检出限为1CFU/100ml，海水样品的检出限为10CFU/100ml。2　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T5750.2生

4、活饮用水标准检验方法样品的采集与保存GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB17378.7海洋监测规范第七部分：近海污染生态调查和生物监测HJ/T164地下水环境监测技术规范HJ/T91地表水和污水监测技术规范3　术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1肠球菌Enterococci41℃培养24h，能产生β-半乳糖苷酶（β-Ｄ-galactosidase），分解选择性培养基中的4-甲基伞形酮-β-Ｄ-葡萄糖醛酸苷（4-methyl-umbelliferyl-β-Ｄ-glucoside，MUG）

5、释放出荧光物质（4-甲基伞形酮）的革兰氏阳性菌。3.2最大可能数mostprobablenumber（MPN）又称稀释培养计数，是一种基于泊松分布的间接计数法。利用统计学原理，根据一定体积不同稀释度样品经培养后产生的目标微生物阳性数，查表估算一定体积样品中目标微生物存在的数量（单位体积存在目标微生物的最大可能数）。4　方法原理7DB21/T****—2018在特定温度下培养特定的时间，肠球菌能产生β-半乳糖苷酶，分解荧光底物释放出荧光产物，在366nm紫外灯照射下产生特征性荧光。统计荧光反应出现数量，查M

6、PN表，计算样品中肠球菌的浓度值。1　试剂和材料除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，符合GB/T6682三级标准的蒸馏水或去离子水。5.1培养基市售Enterolert培养基，也可以使用其他等效产品。5.2硫代硫酸钠溶液：ρ（Na2S2O3·5H2O）=0.10g/ml称取硫代硫酸钠（Na2S2O3·5H2O）10.0g，溶于适量实验用水，定容至100ml，临用现配。5.3乙二胺四乙酸二钠溶液：ρ（C10H14N2O8Na2·2H2O）=0.15g/ml称取乙二胺四乙酸二钠（C10H14N

7、2O8Na2·2H2O）15.0g，溶于适量实验用水，定容至100ml，此溶液保质期为30d。5.4无菌水实验用水经121℃高压蒸汽灭菌20min，备用。2　仪器和设备6.1恒温培养箱：能够恒温至41℃，控温精度0.5℃。6.2高压蒸汽灭菌器：能够加热至121℃。6.3紫外灯：台式，366nm。6.4封口机：用于定量盘的封口。6.5采样瓶：具螺旋帽或磨口塞的250ml玻璃瓶。6.6三角瓶:100ml。6.797孔定量盘。6.8一般实验室常用仪器和设备。7DB21/T****—2018注：移液管、量筒、采样

8、瓶、三角瓶等玻璃器皿和采样器具应按无菌操作要求包扎，于121℃高压蒸汽灭菌20min，烘干，备用。灭菌后的采样瓶，两周内未使用，需重新灭菌。1　样品7.1样品采集与保存按照GB/T5750.2、GB17378.7、HJ/T164和HJ/T91的相关规定进行样品采集。采样后水样应在4℃下冷藏保存，6h内开始检测。7.2干扰和消除7.2.1含活性氯（余氯）的水样，在采样瓶灭菌前需加入0.2ml硫代硫酸钠溶液。7.2.2含重金属的水