水中大肠菌群快速检测方法-酶底物-孙宗科

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1、水中大肠菌群快速检测方法-酶底物法与多管发酵法的比较《卫生研究》2006第3期孙宗科丁培薛金荣陈西平1吴榕2张雅婕3张淑红4遇晓杰5中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所,北京100021摘要:目的比较酶底物法与多管发酵法用于水中大肠菌群的检测。方法应用加标试验和实际水样检测的方式,比较酶底物法与多管发酵法用于水中大肠菌群检测结果的一致性,以及假阳性率。结果酶底物法与多管发酵法用于水中大肠菌群检测结果具有一致性,假阳性率无统计学意义的差别。结论酶底物法可以用作评价水质微生物污染的标准方法。关键词:大肠菌群酶底

2、物法多管发酵法快速检测Comparisonbetweenrapiddetectionmethodofenzymesubstratetechniqueandmultiple-tubefermentationtechniqueinwatercoliformbacteriadetectionSunZongke,WuRong,ChenXiping,etal.InstituteforEnvironmentHygieneandHealthRelatedProductSafety,ChineseCenterforDiseaseC

3、ontrolandPrevention,Beijing100021,ChinaAbstract:Inordertocomparebetweenrapiddetectionmethodofenzymesubstratetechniqueandmultiple-tubefermentationtechniqueinwatercoliformbacteriadetection,inoculatedandrealwatersamplesareincludedinthisexperiment.Resultsdemonstra

4、tethatenzymesubstratetechniqueshowsequivalencewithmultiple-tubefermentationtechnique.Itissuggestedthatenzymesubstratetechniquecanbeusedasastandardmethodforwatermicrobiologicalsafetyevaluation.Keywords:coliformbacteria,enzymesubstratetechnique,multiple-tubeferm

5、entationtechnique,rapiddetection目前我国对生活饮用水、水源水、地表水等进行卫生学评价,检测的指标为大肠菌群(coliformbacteria)和粪大肠菌群(faecalcoliforms),以这两种指标作为粪便污染的指示菌。采用的标准检测方法为膜过滤法(MF)和多管发酵法(MTF)。但这两种方法检测时间相对较长,需2~5天,需验证试验,试验步骤较为繁琐,不能对水的卫生学状况做出快速评价。因此,采用快速简便的检测方法十分必要。酶底物法可以较好的弥补传统方法的不足。酶底物法(enzyme

6、substratetechnique)采用大肠菌群细菌能产生β-半乳糖苷酶(β-D-galactosidase)分解ONPG(Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside)使培养液呈黄色,以及大肠埃希氏菌产生β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase)分解MUG(4-methyl-umbelliferyl-β-D-glucuronide)使培养液在波长366nm紫外光下产生荧光的原理,来判断水样中是否含有大肠菌群及大肠埃希氏菌。酶底物法可以采用成品的培养基及试剂,基金项目:G

7、B/T5750《生活饮用水标准检验方法》修订工作项目。作者简介:孙宗科,男,实习研究员责任作者:陈西平,男,研究员1中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所,2农业部食品质量监督检验测试中心(上海),3北京市疾病预防控制中心,4河北省疾病预防控制中心,5黑龙江省疾病预防控制中心操作方便;无需确认试验;酶底物法检测时间较短,18h-24h即可同时判断水样中大肠菌群和大肠埃希氏菌的MPN值。由于酶底物法用于水样定量检测时采用最可能数(MPN,mostprobablenumber)的技术和方法,所以,本项试验中比较酶

8、底物法与多管发酵法用于水样的检测。材料与方法材料与试剂。本试验中酶底物法采用指定受检物检验技术(DST,definedsubstratetechnology),其MMO-MUG培养基、试验材料和仪器由爱德士公司提供,试验菌株来源于中国普通微生物菌种保藏管理中心和中国医学微生物菌种保藏管理中心,细菌鉴定用API20E由生物梅里埃公司提供。其它所用培养基与试剂按

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