欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:53740122
大小:546.38 KB
页数:4页
时间:2020-04-21
《DDP细胞顺铂敏感性的研究-论文.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、实用肿瘤杂志2012年第27卷第6期·583·MicroRNA-181a提高A549/DDP细胞顺铂敏感性的研究冯春来,王智刚,李皓(1.常州市第一人民医院呼吸科,江苏常州213003;2.江苏大学附属人民医院中心实验室,江苏镇江212001)摘要:目的观察miR一181a对A549/DDP细胞顺铂敏感性的影响,并探讨其机制。方法采用miR一181anllmic转染A549/DDP细胞,MTT法检测细胞增长率;荧光定量PCR检测A549/DDPmiR一181a表达;免疫印迹法检测Bcl一2蛋白表达;AnnexinV/PI双标
2、法检测细胞凋亡。结果miR一181a提高A549/DDP细胞的顺铂敏感性,促进顺铂诱导的细胞凋亡,并且降低Bcl一2蛋白的表达。结论miR一181a通过降低Bcl一2蛋白表达,促进顺铂诱导的细胞凋亡,从而提高A549/DDP细胞顺铂敏感性。关键词:肺肿瘤;微RNAs;腺癌;顺铂/药理学;转染;细胞凋亡中图分类号:R734.2文献标志码:A文章编号:1001.1692(2012)06~583—04肺癌是恶性肿瘤中的常见病和多发病,且发病CUCCGAACGUGUCACGUTT)购自GenePharlTla公司。率呈日渐上升趋势,
3、而治疗效果却不令人满意¨J。取对数生长期细胞进行细胞转染,按Lipofectamine化疗是肺癌治疗的主要手段,但肿瘤对化疗药物产2000说明书的方法将miR.181a和阴性对照分别转染生耐药常常导致化疗失败,也是复发、转移的主要到A549/DDP细胞中。取对数生长期细胞接种于6原因。因此,克服和干预肿瘤细胞耐药是临床亟孑L板,每孔1.0X10个细胞,细胞生长至占培养孑L待解决的问题。有研究发现microRNA-181a(miR一80%~85%时进行转染。首先弃去旧培养液,用PBS181a)是一种肿瘤抑制因子,与肿瘤耐药有关
4、。本实液洗涤细胞1次。制备miRNA/Lipofectamine2000复验旨在研究miR一181a对A549/DDP细胞顺铂敏感合物,6孑L培养板每孑L试剂用量如下:稀释10性的影响,并且探讨其机制,以期为肺癌耐药的治疗Lipofectamine2000至100l无血清培养液OPTI—提供新的方法。MEM中,充分混匀,室温放置5分钟;同时用100I,zL无血清培养液OPTI—MEM稀释4g质粒载体,充分1材料与方法混匀,室温放置5分钟;将两种混合物轻轻混合均匀,1.1细胞和细胞培养A549和A549/DDP细胞株室温放置2
5、0分钟即得到miRNA/Lipofectamine2000由江苏大学附属人民医院中心实验室保存。两种细复合物。将miRNA/Lipofectamine2000复合物轻滴胞均常规培养于含10%胎牛血清的RPMI一1640完人到6孔培养板孔中,轻晃6孔板将复合物摇匀。全培养液中,含100kU/L青霉素、链霉素,置于37~C培养箱培育l8—24小时后,每孔加1800L含37~C、5%CO,的饱和湿度的培养箱中培养,2—3天10%胎牛血清的RPMI.1640培养液培养细胞。转染换液1次。0.25%胰酶消化传代。48小时后,倒置荧光显
6、微镜观察转染率,转染率约1.2研究方法75%,取细胞进行实验。1.2.1microRNA转染miR一181amimie(AACAU1.2.2荧光定量PCR方法检测miR-181a表达UCAACGCUGUCGGUGASGU)和阴性对照(NC)(UUmiR.181a的检测和定量采用GenePharma公司的Harpin.itmiRNA一181aqPCRQuantitationKit进行,茎环反转录引物和定量引物由此试剂盒提供,操作收稿日期:2012—02—18步骤按照此试剂盒进行。简要如下:采用trizol法提基金项目:常州市青
7、年医学创新人才计划(常卫科教取细胞内的总RNA,1gRNA进行反转录。反转『2010]368号)作者简介:冯春来(1976一),女,江苏常州人,常州市第一录体系如下(40L):5XRTbuffer8L,dNTP(10人民医院副主任医师,硕士,从事肺癌的基础与临床研究.txmol/L)1.5L,U6Primer(10~zmo]/L)2.4L,通信作者E—mail:yykjk80814@qq.COnlmiR.181aPrimer(10~mol/L)2.4L,RNasin(400·584·JournaIofPracticalOnc
8、oloRyVo1.27No.62012U/p.L)0.5L,反转录酶MMLV(200U/p~L)0.4每次l0分钟,加入ECL发光试剂,摄影。Westernp.L,RNA1P.g,ddH2O至40L。反转录条件:blot图像结果扫描存人计算机,用QuantityOne图像16℃,30分钟;
此文档下载收益归作者所有