产多糖枸杞内生菌的分离鉴定及其对小鼠的安全性试验-论文.pdf

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1、科技视野lHORIZONOFSCIENCEANDTECHNOIOGY产多糖柯杞内生菌硇分离鉴定及其对小寓的安茔性试验赵影徐海燕辛国芹武香玉董佩佩谷巍(山东宝来利来生物工程股份有限公司)[中图分类号]Q939．9[文献标识码]A[文章编号]1002—8358(2014)12—18—4摘要：通过组织分离法从野生枸杞组织中分离得到1试验材料20株内生菌，采用苯酚硫酸法对所分离的菌株进行产多糖1．1材料性能测定，筛选得到两株产多糖性能较好的菌株BLCC7—分离源：野生枸杞叶片、茎、根等：0055和BLCC7—00

2、61，研究其l0代内培养物产多糖性能的试验动物：健康昆明种小白鼠(体重l8～22g)，购于山东遗传稳定性，结合菌落形态特征及菌株特异性序列分析等手鲁抗医药股份有限公司，合格证号：SCXK(鲁)2013—0001。段，最终将菌株BLCC7—0055鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus1．2分离培养基subtilis)．菌株BLCC7—0061鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus改良的MRS培养基：蛋白胨1％、牛肉膏1％、酵母膏licheniformis)。同时研究了B【￡C7—0061对小鼠的安全性试0．5

3、％、葡萄糖2％、磷酸氢二钾0．2％、乙酸钠0．5％、柠檬酸铵验，结果表明．每只小鼠灌胃1亿和10亿剂量菌体的范围内0．2％、硫酸镁0．02％、硫酸锰0．05％、吐温一800．1％、pH值对小鼠是安全的6．5(分离乳酸菌)。关键词：分离鉴定；枸杞；内生菌；遗传稳定性；安全性试验LB培养基：酵母膏0．5％、蛋白胨l％、Nacl1％，pH值为7．0(分离芽孢菌等其他细菌)。植物内生菌(plantentophytes)是指一类在其部分或全PDA培养基：马铃薯20％(煮汁)，葡萄糖20g，琼脂部生活史中存活于健康植

4、物组织内部，而不使宿主植物表15g，pH自然(分离真菌)。现出明显感染症状或利于宿主生长的微生物。研究表明，植1．3发酵培养基物尤其是中药内生菌能够产生与宿主相同或相似的药用活乳酸菌发酵培养基为MRS液体培养基；性成分及多种全新的代谢产物，其中很多成份对人类疾病芽孢等细菌发酵培养基为IB液体培养基：的防治和预防有很好的效果。真菌发酵培养基为马铃薯葡萄糖液体培养基(PDB)：枸杞(Lyciumborbarum)是茄科(Solanaceae)枸杞属指示菌发酵培养基：同芽孢菌培养基。(Lycium)-种多年生落

5、叶灌木植物，是我国传统的名贵中药材，其果实被誉为“红宝”而驰名中外。许多研究结果已经证2试验方法明枸杞多糖(LyciumBarbarumpolysaccharide，LBP)是枸杞2．1样品采集与处理的主要功效成分，具有良好的抗氧化活性。现代医学研究发采集云南及泰安地区野生枸杞叶片、茎、根等，置于无菌现，枸杞多糖具有增强免疫力及抗氧化作用。本研究利用组塑料袋中，尽快进行表面消毒处理。织分离法对野生枸杞内生菌进行分离纯化，筛选产枸杞多糖2．2内生茵的分离和纯化性能较好的菌株并研究其产多糖的遗传稳定性，并进一

6、步对采用组织块法对所采集的植物组织进行内生菌的分离。l株枸杞内生菌在小鼠上的安全性进行了测试．为探明枸杞取采集的新鲜样品．用蒸馏水将植物表面洗净．稍十后取其的道地性以及更好地开发利用提供参考．并为开发新的抗根、茎、叶切成适宜大小的小段，在75％乙醇中浸泡1min，氧化活性生物资源提供基础和依据。无菌水漂洗3次后用2．5％NaClO将茎、叶消毒2nlirl，被消18