采用常规电泳设备建立CLARITY透明脑技术-论文.pdf

《采用常规电泳设备建立CLARITY透明脑技术-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、生技术通讯v⋯NLETTTTERSINBIOTECHNOLOGYVOI．Z3j。0．·4斗Jul_·，201I4t4557doi：10．3969~．issn．1009—0002．2014．04．025技术方法采用常规电泳设备建立CLARITY透明脑技术王大炜，程韵，王婷婷，陈晓萍浙江工业大学生物与环境工程学院，浙江杭州310032[摘要]目的：CLARITY是一种全新的组织形态学研究技术，在脑结构与功能研究中具有重要用途。探讨能否采用常规电泳设备开展该项技术。方法：从ICR雌性小鼠取得新鲜脑组织，依次进行多聚甲醛组织固定、聚丙烯酰胺水凝胶包埋、S

2、DS电泳洗涤，通过拍照记录结果。结果：多聚甲醛固定和水凝胶包埋后的脑组织呈乳白色，柔软富有弹性；电泳洗涤后的脑组织从周边开始逐渐透明化，至洗涤第10d时呈现均匀的半透明状态，可用于三维神经网络原位分析。结论：研究结果为采用常规电泳设备开展CLARITY技术提供了基础数据。[关键词]CLARITY；聚丙烯酰胺凝胶；包埋；SDS电泳；透明脑[中图分类号]Q503；Q136[文献标识码]A[文章编号]1009—0002(2014)04—0557-03CLARITYBuildinginConventionalElectr0ph0resisEquipmen

3、tsWANGDa—Wei，CHENGYun，WANGg—Tin&CHENXiao—PingCollegeofBiologicalandEnvironmentalEngineering，ZhejiangUniversityofTechnology，Hangzhou310032，ChinaCorrespondingauthor．E—maihchxp@zjut．edu．CB[Abstract]Objective：CLARITYisanovelmorphologicaltechniquewithimportantapplicationsinbrainst

4、ructureandfunctioninvestigations．Thisstudyaimstoinvestigatewhetherthetechniquecanbesetupwithconventionalelectrophoresisequipments．Methods：FreshintactbrainswereisolatedfromICRfemalemice，followedbyparafor—maldehydefixing，polyaerylamidegelembedding，andSDSwashingelectrophoresis．T

5、heresultswererecordedwithacamera．Results：Milky，softandelastictissueswereobservedafterparaformaldehydefixingandhydrogelembed—ding，graduallytransparentbrainsfromperipherytocentrewereobservedafterwashingelectrophoresis．Atday10withwashingelectrophoresis，thebrainswereinuniformtran

6、slucentbeingsuitablefor3Dneuralnetanalysis．Con-clusion：ThisstudyhassetupbasicdatafortheconventionalapplyofCLARITY．[Keywords]CLARITY；polyacrylamidegel；embedding；SDSelectrophoresis；transparentbrain2013年5月，Deisserothfq等在《』、，0tre》上报道了制片过程中预处理方法的改进，结合计算机图像处一种名为“CLARITY”的全新脑组织形态分析技

7、术，理技术，实现了部分组织结构的立体成像，如大脑海通过构建三维多孔水凝胶网络和选择性洗脱膜脂分马CA1区神经元的3D成像，但并未从根本上解决问子，得到了一种通澈透明的脑结构模型，这种新型模题【9”。CLARITY技术则是采用丙烯酰胺单体在脑型能在完整脑原位呈现立体的神经突触与神经纤维组织内聚合形成水凝胶，利用聚丙烯酰胺水凝胶的投射网络、亚细胞结构、蛋白质／核酸／神经递质的精生物特性，结合和固定组织细胞中的蛋白质与核酸，细结构，在脑结构与功能研究中具有重要应用前景，选择性洗脱阻挡光线通透的脂分子，从而呈现出保因而被认为是2013年全球重要的科技进展

8、。持了原有组织细胞形态的三维立体通透图像”，。CLARITY技术明显改善和突破了传统组织形CLARITY技术中对脂分子的选择性洗脱在电态