北京油鸡MSAP毛细管电泳荧光检测技术的建立-论文.pdf

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1、篷Hereditas(Beijing)2014年5,El，36(5)：495—502WWW．chinagene．cn技术与方法北京油鸡MSAP毛细管电泳荧光检测技术的建立李金龙，唐韶青2，邹智元3，王海潮，徐青1．北京交通大学生命科学与生物工程研究院，北京100044；2．北京市畜牧总站，北京100029；3．北京交通大学软件学院，北京100044摘要：采用毛细管电泳荧光检测技术，对北京油鸡肌肉组织基因组进行甲基化敏感扩增片段多态性(Methylationsensitiveamplifiedpolymorphism，MSAP)检测。通过对基因组DNA用量、预扩产物稀释倍数

2、、选择性引物浓度、Mg浓度、dNTPs浓度和电泳内标量等6个主要参数进行分析和优化，建立了适合北京油鸡基因组DNA甲基化分析的MSAP毛细管电泳荧光检测技术。重复实验表明，建立的毛细管电泳荧光标记的MSAP检测技术能够自动地、高通量地分析北京油鸡基因组的DNA甲基化状态，也适用于其他动植物基因组的DNA甲基化研究。关键词：MSAP；毛细管电泳；荧光标记；北京油鸡EstablishmentoffluorescencelabelingandcapillaryelectrophoresisinMSAPforBeijingYouchickenJinlongLi，ShaoqingT

3、ang，ZhiyuanZou，HaichaoWang，QingXu1．InstituteofLifeScienceandBiotechnology，BeijingJiaotongUniversity，Beijing100044，China；2．BeijingAnimalHusbandryStation，Beo'ing100029，China；3．InstituteofSoftware，Beo'ingJiaotongUniversity，Beijing100044，ChinaAbstract：TheDNAmethylatedstatesinmuscletissuesfrom

4、BeijingYoUchickenwereanalyzedusingmethylationsensi．tiveamplifiedpolymorphism(MSAP)combinedwithfluorescencelabelingandcapillaryelectrophoresistechnology．WeoptimizedtheMSAPexperimentalconditionincludingthegenomicDNAconcentration，dilutionofpre．amplificationprod—uct，theinternalstandardcontent

5、andtheconcentrationsofselectiveprimers．MganddNTPs．RepeatedexperimentsshowedthatthismethodcanautomaticallydetecttheglobalDNAmethylationstatesinBeijingYouchicken．andcanbeextendedtootheranimalsorplantswithcomplexgenomesandrichmethylationpolymorphism．Keywords：methylationsensitiveamplifiedpoly

6、morphism(MSAP)；capillaryelectrophoresis；fluorescencelabeling；BeijingYouchicken收稿日期：2013-09—29；修回日期：2013-12—09基金项目：国家自然科学基金青年基金项目(编号：31101711)，北京市自然科学基金项目(编号：6112018)和中央高校基本科研业务费专项基金项目(编号：2012JBZ003)资助作者简介：李金龙，硕士研究生，专业方向：分子遗传学。E—mail：lijinlong880827@163．tom通讯作者：徐青，博士，副教授，研究方向：分子遗传学。E．mail：

7、qingxu@bjtu．edu．cnDOI：10．3724／SP．J．1005．20l4．0495网络出版时间：2014．1．2210：41：22URL：http：／／www．cnki．net／kcms／detail／11．1913．R．20140122．1041．001．html496篷付Hereditas(Beijing)2014第36卷DNA甲基化是指S．腺苷甲硫氨酸上的甲基基于PAGE电泳结合荧光标记的MSAP方法，并应用团在DNA甲基转移酶(DNAmethyltransferase，于鸡的DNA甲基化研究[¨】。MS