Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1蛋白优势抗原区的鉴定及抗体检测ELISA方法的建立-论文.pdf

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1、第36卷第7期中国预防兽医学报Vo1．36．NO．72014年7月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineJu1．2014doi：10．3969~．issn．1008—0589．2014．07．10I型鸭肝炎病毒VP1蛋白优势抗原区的鉴定及抗体检测ELISA方法的建立董井泉十，张蕾十，马波，师东方，王君伟(东北农业大学动物医学院，黑龙江哈尔滨150030)摘要：为鉴定I型鸭肝炎病毒(DHV．I)VP1蛋白优势抗原区及建立DHV．I抗体检测ELISA方法，本研究以重组质粒pEasy．VP1为模板，将

2、其分为5段(W1．a～e)TL全长VP1经PCR扩增，并分别克隆于pET．32a(+)进行原核表达。经westemblot分析表明，截短表达的蛋白VP1．C(80aa～150aa)抗原性良好。将其纯化作为包被抗原建立了DHV．I抗体的间接ELISA检测方法。经反应条件优化确定：VP1．C包被浓度为2~g／mL，DHV．I抗血清稀释度为1：20，其临界值为0．208。该方法能够特异性检测DHV抗体，与其他常见的几种鸭病阳性血清无交叉反应；其批内和批间重复性试验变异系数均小于9％。应用建立的ELISA方法对48份鸭血清进行了检测，与中和试验相比较，

3、符合率为86．9％。表明该方法可以初步应用于DHV抗体的检测和血清流行病学调查。关键词：鸭肝炎病毒；VP1蛋白；抗原优势区；间接ELISA中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1008．0589(2014)07．0542．05DevelopmentoftheindirectELISAfordetectingtheantibodyofduckhepatitisvirustypeI(DHV—I)coatingwithtruncatedVP1OfDHV—IDONGJing—quang*,ZHANGLeit，MABo，SHIDong-fan

4、g，WANGJun-wei(CollegeofVeterinaryMedicine，NortheastAgriculturalUniversity，Harbin150030，China)Abstract：TodevelopamethodfordetectingantibodiesagainstduckhepatitisvirustypeI(DHV—I)，anindirectenzyme—linkedimmunosorbentassay(ELISA)wasestablishedusingthepurifiedantigenicdominantre

5、gionofDHV—IVP1ascoatingantigenexpressedinE．coli．Undertheoptimalconditionsincludingworkingconcentrationsofcoatingantigenandserumsamples，thedetectionresultsshowedthattheassaywasspecifictodetecttheantibodyagainstDHV—-Iinduckserumandnocross-reactionwithpositiveantiserumfromother

6、relatedduckdiseasevirus．Furthermore，comparingwiththeserumneutralizationtest，thecoincidenceratewas86．9％．TheestablishedELISAmethodprovidedasimpleandrapidserologicaldiagnostictechnique．Keywords：duckhepatitisvirustypeI；VP1protein；antigenicdominantregion；indirectELISA*Correspondi

7、ngauthor；1Equalcontributors收稿日期：2013．12．26基金项目：黑龙江省“十二五”科技攻关项目(GA09B302)；高校博士学科点专项基金(20102325110004)；黑龙江省青年基金(QC04C321十共同第一作者：董井泉(1986一)，男，黑龙江哈尔滨人，硕士研究生，主要从事病毒分子生物学与生物制品学研究；张蕾(1988一)，女，吉林长春人，博士研究生，主要从事病原微生物学研究．通信作者：E．mail：shidf@neau．edu．cn；iwwang@neau．edu．cn第7期董井泉，等．I型鸭肝炎病毒V

8、P1蛋白优势抗原区的鉴定及抗体检测ELISA方法的建立543鸭病毒性肝炎(Duckviralhepatitis，DVH)是由鸭1)，引物由北京华大杰瑞