“上师大5号”巨胚水稻幼穗再生体系的建立-论文.pdf

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1、问题探讨纪哲等：“上师大5号”世胚水稻幼穗再生体系的建立“上师大5号’’巨胚水稻幼穗再生体系的建立纪哲，韩尧雯，时亚琼，李建粤，。(1．上海师范大学生命与环境科学学院，上海200234；2．上海师范大学植物种质资源开发中心，上海200234)EstablishmentofRegenerationSystemforYoungPaniclesofAGiantEmbryoRiceShangshidaNo．5JIZhe，HANYao-wen，SHIYa．qiong，LIJian-yue'摘要：本研究以“上师大5

2、号”巨胚水稻幼穗为外植体成功建立利用转基因技术能够实现快速、有效改良作物遗了再生体系。分析比较了分别以15d继代1次共继代2次和传性状的目标。自1988年首次获得转基因水稻以来，45d连续培养2种愈伤组织诱导方法，对“上师大5号”巨胚水水稻转基因技术得到快速发展。但目前所有利用转基稻幼穗愈伤组织的诱导率、分化率和再生率的影响。结果显因技术成功改良的水稻都属于正常胚水稻品种。建立示，2种诱导方式愈伤组织的诱导率较为接近；15d继代1次诱再生体系是成功进行作物转基因操作的必要条件。目导的愈伤组织体积较大，结

3、构较疏松，颜色较淡，优于45d连续前还未见关于巨胚水稻再生体系建立方面的研究报培养诱导的愈伤组织；15d继代1次诱导的愈伤组织芽分化率道。本试验以“上师大5号”巨胚水稻幼穗作为外植和幼苗再生率都高于45d连续培养诱导的愈伤组织。开展本试验，为今后以“上师大5号”为材料进行遗传转化研究奠定了体成功建立了再生体系。基础。1材料与方法关键词：巨胚水稻；“上师大5号”；幼穗；再生体系；1．1材料不同愈伤组织诱导方式供试水稻材料为“上师大5号”巨胚水稻。中图分类号：S511文献标志码：A1．2培养基文章编号：10

4、01—4705(2014)05枷71巨胚水稻幼穗再生过程中使用的培养基种类及组巨胚水稻的胚体积通常比普通稻米大2～3倍。成见表1。巨胚水稻所含的氨基丁酸¨l2J、维生素El2等营养1．3愈伤组织诱导及培养成分均高于普通水稻。．氨基丁酸，简称GABA，是一在“上师大5号”巨胚水稻生长到孕穗期，剑叶在种非蛋白、功能性氨基酸，能够降低血压J，促进睡倒2叶下5～10cm时，取下叶鞘和叶片包裹好的幼眠、增强记忆力、抗焦虑等j。维生素E是最重要的穗。在无菌环境下用浸湿70％乙醇棉花擦拭包裹幼抗氧化剂之一，对人体具有

5、很好的抗氧化效果，能够清穗的叶鞘和叶片，擦拭1层剥离1层，到幼穗只剩1层除人体内的自由基，延缓衰老。有动物学试验报道显叶鞘包裹，擦拭后用灭过菌的镊子去掉最后1层叶鞘。示，维生素E对高血脂症预防和治疗有明显疗效j。在灭过菌的滤纸上用小刀切碎幼穗，用镊子将切碎的巨胚水稻作为一种具有高营养和保健功能的特种幼穗平摊在含有愈伤组织诱导培养基的培养皿中，用水稻，一直受到国内外特种稻育种者的重视。目前在封口膜封好培养皿，并放于26℃培养箱暗培养，进行我国成功培育巨胚水稻已有一些报道llI4，加j。上海愈伤组织诱导。师

6、范大学植物分子遗传学实验室，也曾在粳型水稻每个培养皿接种1个切碎的幼穗。幼穗培养15d“超2—1O”成熟胚离体培养中获得巨胚突变体，现已通时，将一部分愈伤组织继代于新鲜的愈伤组织诱导培过上海市水稻新品种审定，被定名为“上师大5养基上，开始第1次继代培养，并于15d后继续继代，号’’[连续继代2次，继代培养共45d。剩下的幼穗外植体继续在原培养基中培养，连续培养45d。收稿日期：2013—12—28在完成45d培养时，对每个培养皿中培养的愈伤基金项目：上海市科学技术委员会经费资助项目(编号：0639191

7、41)。作者简介：纪哲(1993一)，女，河南人，本科生，研究方向：生物技术。组织进行观察分析，比较15d继代1次和连续培养通讯作者：李建粤，E-mail：lijianyue01@aliyun．con。45d两种诱导方式下幼穗外植体的出愈率。．71．问题探讨纪哲等：“上师大5号”世胚水稻幼穗再生体系的建立表32种诱导方式的愈伤组织分化及再生比较注：分化率(％)=分化出绿点愈伤组织数／接种至分化培养基的愈伤组织数×100％；再生率(％)：有芽及生根的愈伤组织分化出小绿点的愈伤组织数×100％。分化培养第2

8、8天时观察发现，继代培养诱导愈伤组织但是，与石少华等及于洋等以遗传组成与“上师大5中有4个芽已有长根的表现，而连续培养诱导愈伤组号”巨胚稻非常接近的“超2—10”水稻幼胚¨和成熟织分化出>1am长度的6个芽中只有1个长根。胚为外植体建立再生体系报道中获得的分化率和总体来看，每15d继代1次诱导方式形成的愈伤再生率比较，本研究以2种诱导方法获得的愈伤组织，组织，在分化期间形成的小绿点数较多，分化率较高，分化率和再生率都明显低于石少华等和于洋等